豬Gasp1、Gasp2、Cripto基因?qū)2C12細(xì)胞分化的影響.pdf

1、在骨骼肌的生長和發(fā)育過程中，肌肉生長抑制素(Myostatin, MSTN)是一種重要的細(xì)胞因子，參與肌肉生長的負(fù)調(diào)控。Gasp1、Gasp2、Cripto這三種基因可以通過調(diào)節(jié)MSTN的活性，參與骨骼肌發(fā)育調(diào)控。為了進(jìn)一步研究豬Gasp1、Gasp2、Cripto基因?qū)Τ杉〖?xì)胞分化的影響，本試驗(yàn)通過RT-PCR從豬肌肉組織中擴(kuò)增Gasp1、Gasp2、Cripto基因片段，并將phiC31載體作為骨架，構(gòu)建含有三種不同基因的重組質(zhì)粒(

2、Gasp1-、Gasp2-、Cripto-phiC31)。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至C2C12小鼠成肌細(xì)胞，用嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)這三種基因的細(xì)胞系后，利用CCK-8法檢測細(xì)胞的增殖能力。同時(shí)利用HE染色法觀察分化3d時(shí)的細(xì)胞形態(tài)變化。并分別在細(xì)胞分化1d、2d、3d、4d、5d時(shí)收集細(xì)胞，采用Q-PCR檢測MyoD、MyoG、P21及MHC肌細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)變化，進(jìn)而分析這三種基因?qū)∪夥只挠绊?。結(jié)果表明:成功克隆了豬Gasp1、G

3、asp2、Cripto基因，并成功構(gòu)建了該基因的phiC31真核表達(dá)載體;轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞后，通過嘌呤霉素篩選成功獲得穩(wěn)定表達(dá)豬Gasp1、Gasp2、Cripto基因的C2C12細(xì)胞系;通過CCK-8法檢測繪制生長曲線，發(fā)現(xiàn)豬Gasp1、Gasp2、Cripto基因可以促進(jìn)C2C12細(xì)胞增殖;最后通過熒光定量檢測MyoD、MyoG、P21、 MHC以及HE染色證實(shí)發(fā)現(xiàn)豬Gasp1、Gasp2、Cripto基因可以促進(jìn)C2C12細(xì)胞分