沉默PPARγ2對BMP9介導的C2C12細胞成骨分化的影響.pdf

1、實驗目的:
　　研究沉默PPARγ2在BMP9介導的C2C12細胞成骨分化的影響及可能機制。
　　實驗方法:
　　采用化學發(fā)光測定法、組織化學染色、PCR、Western blotting、螢光素酶報告質(zhì)粒等技術，研究沉默PPARγ2在BMP9誘導的小鼠C2C12細胞成骨分化的影響。具體方法如下:
　　1.檢測單獨及聯(lián)合使用AdSimPPARγ2、AdBMP9后，C2C12細胞早期成骨指標堿性磷酸酶(alkali

2、ne phosphatase，ALP)的活性變化。
　　2.從基因表達水平和蛋白質(zhì)表達水平檢測單獨及聯(lián)合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后，C2C12細胞早期成骨指標的表達情況
　　3.檢測AdSimPPARγ2和/或AdBMP9對C2C12細胞成脂分化轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα的影響。
　　4.檢測單獨及聯(lián)合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后，晚期骨鈣蛋白(OCN)的表達及礦化基質(zhì)沉積的變化。
　　5

3、.利用報告質(zhì)粒及Western blotting，檢測使用AdSimPPARγ2和/或BMP9對BMPR-Smad信號通路轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　6.利用Western blot，檢測使用AdSimPPARγ2和/或BMP9對PTEN信號通路轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　7.利用RT-PCR，檢測使用AdSimPPARγ2和/或BMP9對IGF1細胞因子的影響，利用條件培養(yǎng)基，過表達IGF1，比較IGF1與AdSimPPARγ2對細胞

4、堿性磷酸酶活性的影響。
　　實驗結果:
　　1.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應用增強早期C2C12細胞ALP活性。
　　2.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應用增加AdBMP9誘導的C2C12細胞早期成骨轉(zhuǎn)錄因子的表達。
　　3.AdSimPPARγ2和BMP9聯(lián)合應用能抑制AdBMP9誘導的C2C12細胞成脂分化因子C/EBPα的表達。
　　4.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合

5、應用抑制AdBMP9誘導的晚期骨鈣素的表達并減弱C2C12細胞礦化基質(zhì)沉積。
　　5.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應用僅能在早期激活BMPR-Smad信號通路。
　　6.AdSimPPARγ2和AdBMP9聯(lián)合應用能抑制AdBMP9誘導的PTEN信號通路。
　　7.AdSimPPARγ2促進AdBMP9誘導的C2C12細胞早期成骨中IGF1基因表達，從而增強早期成骨分化。
　　實驗結論:
　　沉