13145.紅色糖多孢菌基因敲除和sace_0069基因功能研究

1、UDC：華東理工大學(xué)學(xué)位論文紅色糖多孢菌基因敲除和SACE_0069基因功能研究古明珠指導(dǎo)教師姓名：葉邦策教授華東理工大學(xué)申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)名稱：生物化工論文定稿日期：20130424論文答辯日期：20130530學(xué)位授予單位：華東理工大學(xué)學(xué)位授予日期：翻僻5籍2一j藉答辯委員會(huì)主席：鮑杰教授評閱人：史賢明教授周英副教授華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文第1頁紅色糖多孢菌基因敲除和SACE0069基因功能研究摘要紅色糖多孢菌的次級代謝產(chǎn)物紅霉

2、素及其衍生物應(yīng)用廣泛，為提高紅霉素產(chǎn)量和揭示相關(guān)代謝調(diào)控機(jī)制，越來越多的基因工程研究和改造技術(shù)應(yīng)用于紅色糖多孢菌。本論文研究了電擊轉(zhuǎn)化、結(jié)合轉(zhuǎn)移、PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化三種基因敲除方法，利用PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體法成功實(shí)現(xiàn)了紅色糖多孢菌中基因的敲除，獲得了SACE0069，SACE0500，SACE1897，SACE3795四個(gè)基因敲除菌。SACE0069為鏈霉菌中負(fù)調(diào)控基因nsdA在紅色糖多孢菌中的高度同源基因，其敲除菌與模式菌表型差

3、異實(shí)驗(yàn)表明該基因在紅色糖多孢菌孢子分化和紅霉素合成方面有負(fù)調(diào)控作用。另外，轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示SACE0069敲除菌中表達(dá)差異倍數(shù)在兩倍以上的基因有500多個(gè)，表達(dá)差異倍數(shù)在三倍以上的基因有120多個(gè)，這些基因涉及到能量代謝、糖代謝、氨基酸代謝等多條代謝途徑。根據(jù)轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步設(shè)計(jì)了凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)，并得到了兩個(gè)疑似靶基因SACE6415和SACE6240。本課題對SACE0069基因功能的研究，一定程度上為紅霉素高產(chǎn)菌株的篩選提供了新