10985.兔oct4基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)rfp表達(dá)載體的構(gòu)建及驗(yàn)證

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：S14632學(xué)位論文兔OCT4基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)，RFP表達(dá)載體的構(gòu)建及驗(yàn)證指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：李和平李善剛碩士唐瀾教授東北林業(yè)大學(xué)副教授上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2014年04月東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖論文答辯日期：2014年6月8日授予學(xué)位日期：2014年6月答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：聾多參櫛素大學(xué)摘要OCT4轉(zhuǎn)錄因子在維持和調(diào)控胚胎干細(xì)胞的多能性中發(fā)揮著重要的作用

2、。OCT4基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)標(biāo)志蛋白的表達(dá)對(duì)胚胎干細(xì)胞多能性研究和iPS的建立有重要的意義。由于綠色熒光蛋白(Greenfluorescentprotein，GFP)在慢病毒轉(zhuǎn)染過程中常用作轉(zhuǎn)染標(biāo)記，因此構(gòu)建兔OCT4基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)紅色熒光蛋白(Redfluorescentprotein，RFP)的表達(dá)，將有利于兔iPS制各的研究。本研究通過PCR方法克隆了兔的OCT4啟動(dòng)子(rOCT4)，構(gòu)建了rOCT4驅(qū)動(dòng)RFP的表達(dá)載體rOCT4RF

3、P，經(jīng)轉(zhuǎn)染小鼠ES細(xì)胞驗(yàn)證正確后，將rOCT4RFP轉(zhuǎn)染兔成纖維細(xì)胞系獲得兔rOCT4RFP成纖維細(xì)胞。結(jié)果：經(jīng)過酶切和測(cè)序驗(yàn)證，證明rOCT4RFP構(gòu)建成功，而且能夠在小鼠ES細(xì)胞系E14中表達(dá)細(xì)胞紅色熒光蛋白，而分化后的rOCT4RFP轉(zhuǎn)基因E14細(xì)胞不表達(dá)紅色熒光蛋白。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移、抗性篩選和PCR鑒定建立了rOCT4RFP轉(zhuǎn)基因成纖維細(xì)胞系。7OCT4啟動(dòng)子的甲基化與干細(xì)胞的多能性有關(guān)，為將來研究OCT4啟動(dòng)子的甲基