抗AIV（H-,9-N-,2-）抗體獨(dú)特型雜交瘤細(xì)胞株的建立及其產(chǎn)物生物學(xué)特性的研究.pdf

1、本研究用標(biāo)準(zhǔn)AIV H9N2亞型毒株接種SPF雞胚，收獲尿囊液。經(jīng)過(guò)差速離心，進(jìn)行蔗糖密度梯度超速離心。根據(jù)流感病毒的浮密度(g/cm3)范圍(1.19～1.25)，確定蔗糖的密度梯度為30～60﹪。根據(jù)AIV的直徑范圍(80～120nm，平均為100nm)，確定離心轉(zhuǎn)速為30000r/min，離心時(shí)間3h。再經(jīng)過(guò)透析后，用分光光度法測(cè)定其病毒含量為1.638mg/mL。本研究采用兔抗AIV血清IgG作為包被抗原，以間接ELISA法檢測(cè)

2、雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液，篩選到分泌抗雞和兔共有獨(dú)特型表位抗體的融合細(xì)胞，從而獲得分泌目的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系。經(jīng)過(guò)預(yù)試驗(yàn)，表明最適抗原包被量為102μg/mL。采用間接ELISA檢測(cè)法，篩選獲得3株(2E6H1、2E6G4、3E3D7)分泌特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。3株融合細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的單克隆抗體效價(jià)均為2-4，小鼠腹水中的單抗效價(jià)是1：3200。經(jīng)檢測(cè)表明，三株細(xì)胞系產(chǎn)生的單克隆抗體僅與相應(yīng)的雞抗H9N2亞型AIV血清發(fā)生特