抗雞SIgA單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立.pdf

1、家禽黏膜免疫作為動(dòng)物機(jī)體抵抗病原感染的第一道免疫屏障有著重要的意義。分泌型免疫球蛋白A(SIgA)做為黏膜免疫的效應(yīng)因子，對(duì)病原菌在黏膜表面黏附、增殖，啟動(dòng)免疫學(xué)生物活性，清除病原及保護(hù)機(jī)體抗感染等方面發(fā)揮重要作用。
　　 雜交瘤技術(shù)，是20世紀(jì)70年代到80年代誕生的生物高新技術(shù)，應(yīng)用免疫學(xué)的抗體產(chǎn)生原理和細(xì)胞雜交技術(shù)，獲得單一抗原決定簇的高度均一的相應(yīng)抗體，該種抗體特異性好，敏感性高，來(lái)源穩(wěn)定，容易標(biāo)準(zhǔn)化，與多克隆抗體相比，

2、具有顯著的特點(diǎn)。
　　 本研究首次以新鮮的雞膽汁為材料，采用硫酸銨鹽析法從雞膽汁中粗提純雞SIgA，應(yīng)用SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳鑒定和純化SIgA重鏈，再用純化的雞SIgA重鏈蛋白與等體積的弗氏完全佐劑充分混合頸背部皮下多點(diǎn)注射8周齡雌性Balb/c小鼠，SIgA 50μg/只，隔2周后用弗氏不完全佐劑與之混合，共免疫2次，超強(qiáng)免疫純抗原以100μg/只尾靜脈和腹腔注射。3d后取小鼠脾細(xì)胞與NS0骨髓瘤細(xì)胞

3、，在聚乙二醇(PEG-1500)作用下進(jìn)行細(xì)胞融合，當(dāng)融合細(xì)胞長(zhǎng)滿細(xì)胞培養(yǎng)板時(shí)，用間接ELISA進(jìn)行陽(yáng)性雜交瘤的篩選，通過(guò)有限稀釋法3次克隆后，篩選出1株能夠穩(wěn)定分泌抗雞SIgA單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株5H9。經(jīng)間接ELISA檢測(cè)驗(yàn)證，其細(xì)胞培養(yǎng)上清和腹水效價(jià)為1:400-1:800，1:16000，表明所獲得的單克隆抗體具有和SIgA高度親和力和特異性。6個(gè)月內(nèi)連續(xù)凍存和復(fù)蘇3次，并連續(xù)傳代10次后，抗雞SIgA雜交瘤細(xì)胞株仍能穩(wěn)定分