ATRA聯(lián)合g-CSF對骨髓瘤細胞生長、分化及RARα2表達的影響.pdf

1、背景與目的:多發(fā)性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)是一種起源于漿細胞的惡性腫瘤，總體上MM仍然是一種不可治愈的疾病。研究顯示1.0umol/L全反式維甲酸（ATRA）對RARα2+的骨髓瘤細胞及急性非淋巴細胞白血?。ˋML）細胞有促凋亡作用，1000U/mL粒細胞集落刺激因子(G-CSF)能促進AML細胞RARα2+表達增加并與ATRA有協(xié)同促凋亡作用。但兩藥聯(lián)合對之MM方面的研究國內(nèi)外目前研究較少。本研究通過觀察G-CS

2、F與ATRA對骨髓瘤細胞的生長、調(diào)亡和分化的影響，檢測骨髓瘤細胞株及原代骨髓瘤細胞RARα2的表達情況，探討兩者的關系，從而為尋找更多有效的多發(fā)性骨髓瘤治療藥物提供實驗依據(jù)。
　　方法:人骨髓瘤細胞RARα2+細胞株(OPM2)，RARα2-細胞株(U266)以G-CSF(1000U/mL、2000U/mL)、ATRA(1.0umol/L)干預后，采用MTT法檢測細胞活力變化;倒置顯微鏡動態(tài)觀察細胞凋亡過程;Annexin-V/P

3、I雙染法檢測細胞凋亡的變化;用半定量RT-PCR方法檢測RARα2mRNA表達變化。用瑞氏-姬母薩染色觀察細胞形態(tài)學變化;流式細胞學分析CD49e表達變化。采用淋巴細胞分離液分離26例MM患者骨髓中單個核細胞，用半定量RT-PCR方法檢測所有標本RARα2mRNA表達情況。
　　結果:在48h時2000U/mLG-CSF、1.0umol/LATRA單藥及聯(lián)合用藥對OPM2細胞的活力分別為對照組的100.75％、89.77％、86.

4、41％;而相應于對U266細胞的活力分別為對照組的94.21％、96.73％、96.06％。在48h時ATRA可抑制OPM2細胞的生長(P＜0.05)，G-CSF單藥組的生長抑制率＜0，聯(lián)合用藥組生長抑制率分別為12.52％、13.59％，均大于兩單藥抑制率(p＜0.05)。而在U266細胞的這種作用不明顯(P＞0.1)。倒置顯微鏡下可見到明顯細胞形態(tài)學變化。2000U/mLG-CSF+1.0umol/LATRA在培養(yǎng)24h后可誘導(8

5、.1±2.0)％的OPM2細胞和(4.5±1.4)％的U266細胞發(fā)生凋亡;培養(yǎng)48h后可誘導(11.6±2.4)％的OPM2細胞和(7.5±3.7)％的U266細胞發(fā)生凋亡。OPM2細胞RARα2mRNA表達水平:G-CSF與ATRA聯(lián)合組及ATRA單藥組均較對照組增加(P＜0.05);G-CSF與ATRA聯(lián)合組均較ATRA單藥組增加(P＜0.05);對照組與各G-CSF單藥組表達無明顯差異(P＞0.05)。U266細胞RARα2mR

6、NA表達水平:溶媒對照組、G-CSF單藥組幾乎不表達;ATRA單藥組及2000U/mLG-CSF+1.0ummol/LATRA聯(lián)合組呈弱表達。瑞氏-姬母薩染色顯示在含ATRA的試驗組，OPM2細胞有細胞核縮小、染色質(zhì)聚集濃縮、核仁數(shù)量減少、胞漿量增加并呈深藍色改變。OPM2細胞表面CD49e的表達率在2000U/mLG-CSF+1.0umol/LATRA聯(lián)合組與對照組分別為(5.1±0.23)％和(2.4±0.47)％。26例患者中部分