通光藤C-,21-甾體有效部位的研究.pdf

1、通光藤系蘿藦科Asclepiadaceae牛奶菜屬植物通光散Marseniatenacissima (Roxb．)wight et Arn．的干燥藤莖，其制劑消癌平在臨床上用于治療胃癌、肺癌、肝癌等各種晚期惡性腫瘤療效確切。本研究組采用活性指標(biāo)指導(dǎo)下的導(dǎo)向分離方法對通光藤抗腫瘤作用的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行的初步研究結(jié)果表明，通光藤乙醇提取物對人胃癌細(xì)胞株SGC-7901增殖具有明顯的抑制作用；進(jìn)一步研究結(jié)果表明，通光藤C<,21>。甾體部位對人胃

2、癌細(xì)胞株SGC-7901增殖抑制作用明顯增強(qiáng)。在此基礎(chǔ)上，本研究采用現(xiàn)代分離鑒定技術(shù)研究通光藤C<,21>。甾體有效部位的化學(xué)成分，建立通光藤C<,21>，甾體對照品；采用平行試驗(yàn)法和正交試驗(yàn)法優(yōu)化通光藤C<,21>。甾體有效部位的制備工藝；采用現(xiàn)代色譜技術(shù)建立通光藤藥材和c<,21>甾體有效部位的含量測定方法。 1、通光藤乙醇提取物和C<,21>甾體部位對人腫瘤細(xì)胞增殖的影響：采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色法測定通光藤乙醇提取物和C<

3、,21>甾體部位對人胃癌細(xì)胞株SGC-7901和人黑色素細(xì)胞瘤A375增殖的抑制作用，結(jié)果表明通光藤C<,21>甾體部位對人胃癌細(xì)胞株SGC-7901增殖具有明顯地抑制作用，且明顯強(qiáng)于通光藤乙醇提取物。 2、通光藤C<,21>甾體有效部位化學(xué)成分研究：綜合運(yùn)用ODS柱色譜和制備高效液相色譜等現(xiàn)代分離技術(shù)進(jìn)行通光藤C<,21>甾體有效部位化學(xué)成分的分離，綜合運(yùn)用UV、ESI-MS、<'1>H-NMR、<'13>C-NMR、DEPT

4、、HMBC等數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，從通光藤C<,21>甾體有效部位中分離鑒定了6個(gè)化合物，其中12β-O-2-甲基于?；?通光藤苷元A為首次從通光藤藥材中分離得到的天然化合物；建立通光藤C<'21>甾體對照品通光藤苷H和11α-O-順芷酰基-12β-O-乙?；煌ü馓佘赵狟，為通光藤C<'21>甾體有效部位制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。 3、通光藤藥材含量測定方法研究：選用通光藤藥材中含量較高的通光藤苷H為對照品，比色法測定

5、通光藤藥材中C<'21>甾體的含量。首次采用正交試驗(yàn)法考察了顯色溫度、顯色時(shí)間、顯色劑比例對顯色的影響，確定以濃硫酸一甲醇(6:1)為顯色劑于60℃水浴顯色60分鐘。通光藤苷H濃度在9.59-47.95μg/mL范圍內(nèi)與吸收度呈良好線性關(guān)系(r=0.9999)，平均加樣回收率100.01％(RSD=2.32％，n=6)，不同產(chǎn)地通光藤藥材含量測定結(jié)果表明，藥材中C<'50>甾體含量差異較大，以產(chǎn)于云南臨滄的通光藤藥材含量最高，云南昭通的

6、含量最低。 4、通光藤C<'21>甾體有效部位制備工藝研究：采用平行試驗(yàn)法和正交試驗(yàn)法優(yōu)選出最佳乙醇提取工藝條件為：通光藤藥材加6倍量90％乙醇回流提取3次，每次90分鐘；采用大孔吸附樹脂法富集通光藤C<'21>甾體，優(yōu)選出最佳純化工藝條件為：選用D101型大孔吸附樹脂，上樣濃度1g生藥/mL，上樣流速1Bv/h，依次用10％乙醇、30％乙醇和乙醇6BV洗脫，收集乙醇洗脫液。 5、通光藤C<'21>甾體有效部位含量測定方

7、法研究：采用比色法測定通光藤C<,21>甾體有效部位中C<,21>，甾體含量，6個(gè)批號(hào)樣品平均含量為0.8568-0.9371g/g；采用高效液相色譜法測定通光藤C<,21>甾體有效部位中11 α-O-順芷?；?12β-O-乙?；?通光藤苷元B的含量，11α-O-順芷?；?12β-O-乙?；?通光藤苷元B進(jìn)樣量在1.016-5.080μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)；平均加樣回收率100.16％(RSD=1.