達(dá)沙替尼聯(lián)合卡鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　 卵巢癌是致死率最高的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第二位。由于對(duì)卵巢癌缺乏有效的早期診斷手段，因此，大多數(shù)卵巢癌患者被確診時(shí)已屬晚期。目前對(duì)于晚期卵巢癌的治療，主要是以手術(shù)聯(lián)合鉑類等化療藥物為主，結(jié)合一些免疫治療及綜合治療，但是仍有多數(shù)患者最終會(huì)出現(xiàn)卵巢癌的復(fù)發(fā)并隨著疾病進(jìn)展而死亡，其中大多數(shù)病例在治療后的兩年內(nèi)復(fù)發(fā)，所以卵巢癌患者死亡率很高，晚期患者5年生存率僅為15％左右，因此，積極尋找和探索有效

2、的化療藥物極為重要。
　　 達(dá)沙替尼(Dasatinib)是一種Src家族的淋巴細(xì)胞酪氨酸激酶(lymphocyte cellkinase，LCK)抑制劑，為替尼類ABL和SRC激酶雙重抑制劑。達(dá)沙替尼能結(jié)合SFK家族(SRC、LCK、LYN、FGR、BLK、FYN、YES和HCK)等多種激酶均有抑制作用，抑制下游目標(biāo)基因的自動(dòng)磷酸化，從而發(fā)揮抗腫瘤作用，同時(shí)達(dá)沙替尼對(duì)于c-kit、EphA2和PDGFR-B，也有抑制作用。酪氨

3、酸激酶抑制劑可抑制其活性及破壞腫瘤細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)，抑制腫瘤細(xì)胞增殖和新生血管形成，間接抑制腫瘤的生長(zhǎng)，而對(duì)正常細(xì)胞影響較小。達(dá)沙替尼是近年抗腫瘤藥研究的熱點(diǎn)，近幾年研究顯示達(dá)沙替尼可以抑制許多的實(shí)體瘤包括皮膚、乳腺、骨、肺、結(jié)腸、前列腺、頭和頸、胰臟等。本實(shí)驗(yàn)基于達(dá)沙替尼的多種作用機(jī)制，研究了達(dá)沙替尼聯(lián)合卡鉑對(duì)卵巢癌OVCAR3、H08910細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡的影響，并從細(xì)胞凋亡方面初步探討其作用機(jī)制，為達(dá)沙替尼聯(lián)合卡鉑的臨床應(yīng)用提供實(shí)

4、驗(yàn)依據(jù)。
　　 Eph屬于受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases，RTKs)超家族中最大的一個(gè)亞族，EphA2是Eph受體之一，近來研究顯示，EphA2在多種腫瘤組織中高表達(dá)，進(jìn)一步的研究證實(shí)EphA2過表達(dá)促進(jìn)良性腫瘤向惡性發(fā)展。因其在正常及腫瘤組織中表達(dá)的差異性，加之其有別于其他RTKs的結(jié)構(gòu)及功能的特異性，目前EphA2被認(rèn)為是一個(gè)很有潛力的靶點(diǎn)，正成為各種腫瘤防治研究的焦點(diǎn)。
　　 方

5、法:
　　 1、人卵巢癌OVCAR3、HO8910細(xì)胞系分別用達(dá)沙替尼、卡鉑單藥組及兩藥聯(lián)合用藥組不同濃度處理培養(yǎng)48h。
　　 2、MTT法檢測(cè)人卵巢癌OVCAR3、HO8910細(xì)胞系分別用達(dá)沙替尼、卡鉑單藥組及兩藥聯(lián)合用藥組在不同濃度及同一時(shí)間條件下處理48h，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用。
　　 3、通過AnnexinV/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)達(dá)沙替尼、卡鉑單藥組及兩藥聯(lián)合用藥組，不同藥物濃度及同一時(shí)間對(duì)培養(yǎng)人卵巢

6、癌OVCAR3、HO8910的細(xì)胞系，檢測(cè)細(xì)胞凋亡的影響。
　　 4、人卵巢癌OVCAR3、HO8910細(xì)胞系在達(dá)沙替尼、卡鉑單藥組及兩藥聯(lián)合用藥組不同藥物濃度的條件下處理48h，Westem blotting方法檢測(cè)EphA2蛋白表達(dá)含量。
　　 結(jié)果:
　　 1、MTT結(jié)果顯示，在單藥達(dá)沙替尼組、卡鉑組各0.1-20μmol/L不同濃度范圍內(nèi)，作用于人卵巢癌OVCAR3、HO8910細(xì)胞48h后，細(xì)胞的生長(zhǎng)抑

7、制率呈劑量依賴性。其中達(dá)沙替尼1μmol/L、卡鉑1μmol/L單獨(dú)用藥組作用48h后，對(duì)OVCAR3、H08910細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。達(dá)沙替尼與卡鉑聯(lián)合用藥組濃度為0.1μmol/L對(duì)人卵巢癌OVCAR3、H08910細(xì)胞作用48h后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用顯著高于對(duì)照組，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05）。研究顯示了在同一時(shí)間段，藥物濃度的不同，抑制率不同，說明聯(lián)合用藥組的細(xì)胞生長(zhǎng)抑

8、制率要更強(qiáng)于單藥組。
　　 2、AnnexinV/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)達(dá)沙替尼、卡鉑單用藥組1μmol/L作用于0VCAR3、HO8910人卵巢癌細(xì)胞株48h后，各單藥組與對(duì)照組相比具有顯著差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。達(dá)沙替尼、卡鉑聯(lián)合用藥組0.1μmol/L作用于0VCAR3、HO8910人卵巢癌細(xì)胞株48h后，聯(lián)合用藥組與對(duì)照組相比，隨著用藥濃度的增加，其細(xì)胞凋亡率呈現(xiàn)明顯增強(qiáng)的趨勢(shì)，單藥組及聯(lián)合組誘導(dǎo)卵

9、巢癌細(xì)胞的凋亡率均較對(duì)照組增高(P＜0.05)。且聯(lián)合用藥組明顯高于單藥組，差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）。
　　 3、Westem blotting方法檢測(cè)人卵巢癌OVCAR3、HO8910細(xì)胞分別在達(dá)沙替尼、卡鉑單藥組濃度梯度為(0.1、1、10和20μmol/L)作用48h后，隨著藥物濃度增加EphA2蛋白表達(dá)逐漸減弱。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。達(dá)沙替尼、卡鉑在聯(lián)合用藥組濃度梯度為(0.1、1μ