C-,21-甾體糖苷的質(zhì)譜研究.pdf

1、基于質(zhì)譜快速、靈敏及準(zhǔn)確的特性，它已成為高選擇、高通量篩選復(fù)雜天然藥物中活性成分的理想分析工具。尤其是它與高效液相等色譜分離技術(shù)聯(lián)用以及其多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，能夠在線的快速提供大量有關(guān)化合物分子量以及分子結(jié)構(gòu)信息，具有其它分析方法不可比擬的優(yōu)越性。本論文成功地應(yīng)用了電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜高效液相色譜聯(lián)用技術(shù)，開(kāi)展了黑鰻藤和蔓剪草提取物中快速篩選免疫活性的C<,21>甾體苷以及區(qū)分同分異構(gòu)體的研究，并應(yīng)用能量分辨質(zhì)譜以及金屬誘導(dǎo)的質(zhì)譜途徑對(duì)C

2、<,21>甾體苷的裂解規(guī)律進(jìn)行了系統(tǒng)探討。 一)應(yīng)用高效液相色譜/電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)黑鰻藤藤莖中具有免疫活性的C<,21>甾體苷進(jìn)行快速篩選：經(jīng)高效液相色譜分離的C<,21>甾體苷流分在線進(jìn)入質(zhì)譜，在全掃描的一級(jí)質(zhì)譜中主要生成[M+Na]<'+>，觀察不到任何碎片的產(chǎn)生，因而可以準(zhǔn)確地確定C<,21>甾體苷分子量。接著對(duì)[M+Na]<'+>進(jìn)行多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜研究，[M+Na]<'+>經(jīng)碰撞誘導(dǎo)裂解，糖苷鍵斷裂，產(chǎn)生表征糖序列的特征

3、碎片離子，進(jìn)而確定糖鏈的單糖序列；C<,21>甾體苷元母核上的側(cè)鏈中性丟失，依據(jù)中性丟失的分子量，可以推斷側(cè)鏈的組成。為了進(jìn)一步確證，我們還對(duì)各流分進(jìn)行了離線的高分辨傅立葉變換離子回旋共振多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜研究，測(cè)定了分子離子以及各碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)，進(jìn)而確證了各離子的元素組成。依據(jù)各C<,21>甾體苷的多級(jí)質(zhì)譜裂解機(jī)理并對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的液相保留時(shí)間，成功分離鑒定了10個(gè)具有免疫活性的C<,21>甾體苷，其中兩個(gè)是新化合物。高效液相色譜/電噴霧

4、串聯(lián)質(zhì)譜法與質(zhì)譜的選擇離子流圖相結(jié)合，依據(jù)“質(zhì)譜指紋”，成功分離鑒定了黑鰻藤根部包括四組同分異構(gòu)體在內(nèi)的22個(gè)具有免疫活性的三糖基C<,21>甾體苷成分。其中有10個(gè)是新化合物。 二)基于多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)中能量分辨質(zhì)譜可以用來(lái)區(qū)分同分異構(gòu)體的特點(diǎn)，我們首先對(duì)已知C<,21>甾體苷進(jìn)行系統(tǒng)的多級(jí)能量分辨質(zhì)譜的研究，再結(jié)合高效液相色譜/電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，依據(jù)C<,21>甾體苷的質(zhì)譜裂解規(guī)律，成功分離鑒定了蔓剪草中的8個(gè)C<,21>

5、甾體苷，其中四個(gè)是新合物。 三)由于金屬離子常常能誘導(dǎo)化合物的質(zhì)譜裂解模式發(fā)生改變，這為鑒定化合物結(jié)構(gòu)提供了新的契機(jī)。我們對(duì)堿金屬(Li<'+>，Na<'+>，K<'+>，Cs<'+>)、堿土金屬(Ca<'2+>)以及過(guò)渡金屬離子(Fe<'2+>，Co<'2+>，Ni<'2+>，Cu<'2+>，Zn<'2+>)誘導(dǎo)的C<,21>甾體苷的質(zhì)譜裂解機(jī)理進(jìn)行了詳細(xì)系統(tǒng)的研究。并依據(jù)C<,21>甾體糖苷-過(guò)渡金屬離子復(fù)合物的質(zhì)譜裂解機(jī)理