甾體皂苷生物轉(zhuǎn)化及其特異性糖苷酶的研究.pdf

1、博士學(xué)位論文V‘8【J27芻7甾體皂苷生物轉(zhuǎn)化及其特異性糖苷酶的研究studyonbiotransfbrmationofsteroidalsaponins研究生姓名指導(dǎo)教師培養(yǎng)單位專業(yè)名稱anditsspecificglycosidase馮冰王升啟研究員馬百平副研究員軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所藥物分析學(xué)論文提交日期2005年5月30日學(xué)位授予單位中國人民解放罕軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院省體皂苷生物轉(zhuǎn)化及其特異性糖苷酶的研究中文摘要甾體皂苷生物轉(zhuǎn)化

2、及其特異性糖苷酶的研究甾體皂苷(ste∞idalsapolliIlS)是植物中一類重要的生物活性物質(zhì)。常用中藥重樓、黃精、穿山龍、麥門冬、七葉一枝花等都含有大量的甾體皂苷。甾體皂苷具有多種藥理活性，如抗癌、抗癡呆、抗血小板聚集、調(diào)節(jié)免疫以及降血糖等。為了尋找高活低毒的新藥目標(biāo)化合物，人們一直在尋找有效的方法對這類化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和改造。生物轉(zhuǎn)化(Biotr肌sfom撕on)是利用動(dòng)、植物離體細(xì)胞或器官、微生物、或它們所產(chǎn)生的酶等對外源

3、性化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾而獲得有價(jià)值產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化反應(yīng)，具有催化效率高、專一性強(qiáng)和反應(yīng)條件溫和等特點(diǎn)。生物轉(zhuǎn)化與植化方法相比，可以按照一定的設(shè)計(jì)思想，進(jìn)行中藥成分的結(jié)構(gòu)修飾，得到一系列衍生物進(jìn)行構(gòu)效關(guān)系研究。目前為止，有關(guān)天然產(chǎn)物的生物轉(zhuǎn)化研究較多，但對甾體皂苷的生物轉(zhuǎn)化研究相對較少像其c3位糖鏈的選擇性水解未見報(bào)道，更未見有轉(zhuǎn)化規(guī)律性的研究報(bào)道。本論文從中藥重樓中分離制備了5個(gè)甾體皂苷類化合物，結(jié)構(gòu)鑒定為重樓皂苷I(1a)、重樓皂苷III(2

4、a)、重樓皂苷V(3a)、重樓皂苷Ⅵ(4a)和薯蕷皂苷元一30a也吡喃鼠李糖(1—4)印D吡喃葡萄糖苷(2b)，加上本實(shí)驗(yàn)室已有的甾體皂苷知母皂苷AIII(5a)、知母皂苷B1I(6a)，共7種單體化合物用于甾體皂苷生物轉(zhuǎn)化有效菌株和酶的篩選，以及甾體皂苷生物轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究。選用已成功應(yīng)用于掩體化合物羥化的黑根霉月^泐P“s哪礦加ns32050(S01)、新月彎孢霉c。刪“腸州dmMm34381(S02)對甾體皂苷和苷元進(jìn)行羥基化修飾，

5、未能成功。但利用黑根霉可以將螺甾皂苷c22位異構(gòu)化，生成自然界少見的c22節(jié)構(gòu)型的甾體皂苷：筇，2筇(s)一D，25口(s)螺旋甾烷3伊D(22一異薩爾薩皂苷元)3一D妒D一吡喃葡萄糖一(1—2)胡一D一吡喃半乳糖苷(6b)。商品化的糖苷酶，如口葡萄糖苷酶(不論是苦杏仁提取還是基因重組表達(dá))、口一鼠李糖苷酶、半纖維素酶(具有吐L鼠李糖苷酶活性)均不能有效水解甾體皂苷C3位糖鏈的糖基。本論文首次發(fā)現(xiàn)了新月彎孢霉34381體系對鐸體皂苷c3