醛固酮通過調(diào)節(jié)ACE2-Ang(1-7)-Mas受體軸誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的:醛固酮可增加細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)，降低內(nèi)皮相關(guān)的血管舒張作用，并加速慢性腎臟病和心血管疾病的進(jìn)展。由于血管內(nèi)皮功能失調(diào)引起的心血管疾病是慢性腎臟病發(fā)病和死亡最重要的原因。單獨(dú)應(yīng)用醛固酮受體（MR）拮抗劑，或者合并血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）抑制劑和血管緊張素受體抑制劑(ARB)類藥物，可以延緩心血管疾病或者腎臟疾病的繼續(xù)惡化。但是醛固酮引起血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常的具體機(jī)制仍有待研究。本試驗(yàn)主要探討醛固酮對血管內(nèi)皮細(xì)胞ACE2/Ang(1-

2、7)/Mas受體軸的影響，以及與凋亡的關(guān)系。
　　方法:
　　1.體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）分為對照組（DMEM/F12培養(yǎng)基）、醛固酮組（10-8、10-7、10-6mol/L醛固酮進(jìn)行干預(yù)）和醛固酮+拮抗劑組（10-7mol/L醛固酮和10-6mol/L醛固酮受體拮抗劑共同干預(yù)）。
　　2.采用細(xì)胞免疫熒光檢測血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）蛋白的表達(dá)；western blotting檢測ACE2蛋白

3、和Mas受體的表達(dá)；ELISA試劑盒檢測細(xì)胞上清液中AngII，Ang(1-7)的水平。
　　3. caspase-3活性檢測試劑盒檢測凋亡蛋白caspase-3的活性；流式細(xì)胞術(shù)FITC-Annexin V/PI熒光染色檢測HUVECs的凋亡。
　　結(jié)果:
　　1.不同濃度醛固酮干預(yù)HUVECs24h后，ACE2蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)(p<0.01)，并呈濃度依賴性。10-7mol/L醛固酮干預(yù)HUVEC，隨時(shí)間延長，A

4、CE2蛋白和Mas受體的表達(dá)明顯下調(diào)(p<0.01)，呈時(shí)間依賴性，該作用可被醛固酮拮抗劑所抑制。
　　2.隨醛固酮干預(yù)時(shí)間延長，細(xì)胞上清液中 AngII水平增加，而Ang(1-7)水平降低（p<0.01）；而醛固酮拮抗劑干預(yù)后，AngII水平降低，而Ang(1-7)水平增加（p<0.01）。
　　3.醛固酮組細(xì)胞凋亡率及 caspase-3活性顯著高于對照組（p<0.01）,而醛固酮拮抗劑可明顯阻斷這一效應(yīng)。
　　結(jié)