DVL3 和細(xì)胞外因子β-catenin 的表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞發(fā)展的相關(guān)性及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：AMPK（Adenosine5’-monophosphate-activated protein kinase）即AMP依賴(lài)性蛋白激酶是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是調(diào)節(jié)能量代謝的關(guān)鍵分子，是機(jī)體中能源系統(tǒng)的主要監(jiān)管機(jī)構(gòu)，在細(xì)胞或組織中可以通過(guò)調(diào)節(jié)下游信號(hào)分子DVL3和β-catenin蛋白調(diào)控細(xì)胞新陳代謝和保護(hù)其免受各種外界壓力的功能。AMPK激活劑能夠通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)進(jìn)行抑制進(jìn)而達(dá)到治療疾病的效果。但是，對(duì)于AMPK如何活

2、化和如何在癌癥中抑制癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制到目前仍然并不十分清楚。我們通過(guò)研究AMPK激活劑對(duì)乳腺癌細(xì)胞和組織的影響，以期闡明其作用的分子機(jī)制，為將來(lái)用于臨床治療提供可靠的理論依據(jù)。
　　方法：收集并用Western Blot和免疫組化法分析40例乳腺癌患者組織中AMP依賴(lài)性蛋白激酶下游分子DVL3和β-catenin的蛋白質(zhì)表達(dá)水平與乳腺癌細(xì)胞病理特征，預(yù)后以及不同分子亞型之間的相關(guān)性。利用Western Blot法檢測(cè)了加載有D

3、VL3質(zhì)?；蛘遱hRNA-DVL3的MCF-7、MDA-MB-231、T-47D乳腺癌細(xì)胞和MCF-10乳腺細(xì)胞的DVL3表達(dá)和細(xì)胞周期的變化。利用AMPK的激活劑二甲雙胍處理乳腺癌細(xì)胞通過(guò)體外劃痕實(shí)驗(yàn)，Transwell法以及細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞的發(fā)展。構(gòu)建了乳腺癌移植瘤的模式小鼠結(jié)合HE染色和Western Blot法檢測(cè)了DVL3和β-catenin的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：乳腺癌組織中存在DVL3的過(guò)表達(dá)，并且與分型、

4、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分期相關(guān)，DVL3在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)明顯高于原發(fā)灶。DVL3過(guò)表達(dá)與異常表達(dá)跟乳腺癌的不良預(yù)后正相關(guān)，并可作為影響乳腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。DVL3能夠與Wnt/β-catenin信號(hào)通路作用，顯著調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。AMPK激活劑有可能抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，減少DVL3與Wnt/β-catenin信號(hào)的表達(dá)。進(jìn)一步對(duì)轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)或者抑制DVL3的乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)DLV3參與了細(xì)胞的增殖，遷移和凋亡等過(guò)程。

5、>　　AMPK激活劑是通過(guò)減少DVL3的表達(dá)和降低β-catenin水平來(lái)抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。免疫印跡和免疫組織化學(xué)顯示DVL3與β-catenin表達(dá)水平顯著相關(guān)。過(guò)表達(dá)DVL3導(dǎo)致β-catenin表達(dá)水平上升和乳腺癌細(xì)胞的過(guò)度生長(zhǎng)，這證實(shí)通過(guò)Wnt/β-catenin通路激活的DVL3與乳腺癌的發(fā)展有關(guān)。為了闡明機(jī)制，我們?cè)隗w內(nèi)和體外使用了AMPK活化劑確認(rèn)對(duì)DVL3和β-catenin是否存在依賴(lài)關(guān)系。
　　結(jié)論：DLV