肺表面活性物質相關蛋白A1在甲醇酵母中的表達與純化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、呼吸窘迫綜合征(RDS)是導致早產(chǎn)兒死亡的主要因素并與一定的遺傳背景有關.PS替代治療是唯一有效的治療手段.與RDS同樣,肺表面活性物質(PS)的功能或成分的改變與其它呼吸系統(tǒng)疾病相關,如成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、特異性肺纖維化(IPF)和肺部感染.目前臨床使用的PS主要為動物肺組織和人羊水中提取物,價格昂貴,不能滿足臨床的需要,因此人工合成磷脂和基因工程產(chǎn)物生產(chǎn)PS將是獲得PS的最佳途徑.該研究將正常中國人的SP-A1基因分別克

2、隆至酵母分泌表達載體pPIC9K和胞內表達載體pPIC3.5K中,轉化至甲醇營養(yǎng)型酵母Pichiapastoris系統(tǒng),獲得HIS+Mut+和HIS+Muts的重組體,經(jīng)過G418抗性篩選.篩選出高拷貝重組體.以甲醇誘導,篩選高效表達的重組菌種.通過優(yōu)化表達條件,目標產(chǎn)物在搖瓶發(fā)酵液中高效表達,可達200mg/L.將篩選到的高效表達的重組菌種轉入發(fā)酵罐中高密度發(fā)酵、誘導表達,經(jīng)過離心和超濾,得到粗提SP-A1,再經(jīng)過凝膠過濾層析和高效液

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