炎癥性痛大鼠脊髓后角CRH表達(dá)及鞘內(nèi)預(yù)注CRH抗傷害性效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)采用福爾馬林炎癥性痛模型觀察在炎癥性痛和痛覺(jué)敏化過(guò)程中CRH在脊髓后角的表達(dá)變化特點(diǎn)；研究CRH鞘內(nèi)預(yù)注對(duì)福爾馬林誘發(fā)的痛及痛覺(jué)敏化時(shí)的痛行為學(xué)改變和脊髓后角c-fos原癌基因表達(dá)的影響，探討鞘內(nèi)預(yù)注CRH是否具有抗傷害性效應(yīng)。 方法： 1.福爾馬林炎癥性痛誘導(dǎo)大鼠脊髓后角CRH表達(dá)變化 大鼠隨機(jī)分為5組(n=6)：Oh對(duì)照組、2h組、12h組、24h組、48h組，其中對(duì)照組不予任何干預(yù)只作正常生理狀

2、態(tài)下空白對(duì)照。實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物右足跖部皮下注射5％福爾馬林0.1ml致炎癥性疼痛模型，并于注射后2h、12h、24h、48h分別取L4-5脊髓節(jié)段脊髓進(jìn)行免疫組織化學(xué)方法染色，觀測(cè)CRH表達(dá)變化。 2.福爾馬林炎癥性痛鞘內(nèi)預(yù)注CRH抗傷害性效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究 采用福爾馬林炎癥性痛模型，大鼠隨機(jī)分為7組(n=8)，分別于福爾馬林刺激前10min鞘內(nèi)預(yù)注：生理鹽水20μl(NF組)；CRH0.25μg(C1F組)；CRH0.5μg(C

3、2F組)；CRH1.0μg(C3F組)；芬太尼0.25μg(TF組)；CRH0.5μg+芬太尼0.25μg(CTF組)；提前1h腹腔內(nèi)注射CP-154,526(10mg/kg)后鞘內(nèi)給予CRH0.5μg(CPF組)。各組分別在福爾馬林刺激后記錄1h內(nèi)每5min為一時(shí)間段的縮腿舔爪時(shí)間之和，在15min、30min、60min、120min4個(gè)時(shí)相點(diǎn)分別檢測(cè)熱輻射刺激甩尾反射潛伏期即痛閾的變化，并于2h后檢測(cè)脊髓后角原癌基因c-fos的表

4、達(dá)產(chǎn)物Fos蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.0h組即在正常生理狀態(tài)下CRH表達(dá)為陰性。2h組、12h組、24h組、48h組在福爾馬林刺激后各組脊髓后角神經(jīng)元細(xì)胞胞漿CRH染色呈陽(yáng)性，細(xì)顆粒狀，呈棕黃色，胞核不染色，且集中分布在脊髓后角Ⅰ-Ⅱ?qū)印ＥcOh組比較，2h組、12h組、24h組、48h組CRH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多、IOD值增加顯著(P＜0.01)。24h組與2h組比較差異明顯，達(dá)到高峰。48h組與24h組比較表達(dá)明顯減弱

5、，但與24h組比較仍有差異，還沒(méi)有恢復(fù)至正常狀態(tài)。 2.與NF組比較，C2F組的第二相縮腿舔爪時(shí)間明顯縮短(P＜0.05)，CTF組的第一、二相縮腿舔爪縮短最為明顯(P＜0.01)。 3.NF組在福爾馬林刺激后在15、30、60、120min痛閾明顯降低，說(shuō)明機(jī)體處于痛覺(jué)敏化狀態(tài)。C2F組抑制痛閾的下降(P＜0.05)，CTF組與C2F組、TF組比較均有差異(P＜0.05)可顯著抑制痛閾的下降。 4.C2F組、T

6、F組和CTF組與NF組比較，F(xiàn)os蛋白免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目和IOD值減少(P＜0.05)，c-fos基因表達(dá)被抑制，其中CTF組抑制最為顯著。 5.鞘內(nèi)預(yù)注CRH0.25μg、0.5μg、0.1μg，只有0.5μg顯示一定程度的抗傷害性刺激、鎮(zhèn)痛作用。CPF組在縮腿舔爪時(shí)間、痛閾和Fos蛋白表達(dá)方面均與C2F組差異明顯而與NF組無(wú)明顯差異。 結(jié)論： 1.在福爾馬林炎癥性痛及痛覺(jué)敏化的過(guò)程中，脊髓后角淺層CRH表達(dá)呈陽(yáng)

7、性，強(qiáng)度隨時(shí)程遞增，以24h最為顯著達(dá)到高峰后逐漸降低。表明CRH作為一種神經(jīng)遞質(zhì)，可能參與脊髓傷害性信息的傳遞與調(diào)制，為進(jìn)一步研究其對(duì)痛覺(jué)的調(diào)制作用提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。 2.鞘內(nèi)預(yù)注CRH能抑制福爾馬林大鼠致痛模型第二時(shí)相的傷害性行為，抑制痛閾的下降，抑制脊髓后角c-fos基因的表達(dá)，阻滯傷害性感受進(jìn)一步上傳，抑制中樞敏感化，發(fā)揮抗傷害性效應(yīng)，并且這種效應(yīng)不呈劑量依賴(lài)性。 3.鞘內(nèi)預(yù)注CRH的抗傷害性效應(yīng)可以被全身應(yīng)用CR