年輕骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可通過細(xì)胞融合改善年老骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞功能.pdf

1、研究背景及目的：
　　 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC）對間充質(zhì)組織功能的維持和修復(fù)起重要作用。干細(xì)胞的減少可能導(dǎo)致腦、肝臟、皮膚、骨骼等相關(guān)退行性疾病的發(fā)生。小鼠BMSC隨年齡增加，多種細(xì)胞功能發(fā)生改變，包括細(xì)胞集落形成單位功能下降，成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞以及成軟骨細(xì)胞分化能力下降，細(xì)胞增殖能力下降，細(xì)胞端粒酶活性下降，端粒長度縮短。最近的研究表明細(xì)胞融合作為一種有效

2、的再調(diào)控細(xì)胞功能的方法，得到廣泛關(guān)注。有研究表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可與小腸干細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、心肌細(xì)胞等細(xì)胞融合并改變其功能。本文的研究目的是誘導(dǎo)年輕與年老小鼠BMSC融合，探討融合后年輕BMSC對年老BMSC功能的影響。
　　 研究方法：
　　 年輕(2-3月齡)及年老(18-24月齡) C57BL/6 小鼠BMSC在紅色熒光染料PKH26標(biāo)記后分別與年輕及年老綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因C57BL/6小鼠BMSC通過聚乙烯二醇 (

3、PEG 1500)誘導(dǎo)，建立細(xì)胞融合模型。通過流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞融合率和細(xì)胞表面特異性抗原的表達(dá)。免疫熒光顯微鏡觀察融合細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞核特性。通過細(xì)胞計數(shù)比較5組細(xì)胞(年輕組Y，年老組O，年輕融合組Y-Y，年輕年老融合組Y-O,年老融合組O-O) 在2d、4d、6d、8d的細(xì)胞增殖能力。誘導(dǎo)細(xì)胞向成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞分化，比較5組細(xì)胞的分化能力。
　　 結(jié)果：
　　 通過PEG誘導(dǎo)，可獲得30.45％±4.13％的融合細(xì)胞

4、，3組不同年齡融合組的細(xì)胞融合率無統(tǒng)計學(xué)差異，具體數(shù)值為 (29.41％±3.00％ vs.30.54％±1.20％ vs.31.41％±6.63％)，P>0.05。融合細(xì)胞表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面特異性抗原CD44、Sca-1，而不表達(dá)造血干細(xì)胞表面特異性抗原CD34、CD117、CD31、CD45。在2d、4d、6d、8d，Y-O組細(xì)胞數(shù)量增加百分率比O-O組均顯著增高，具體數(shù)值為 (122.2％±4.6％) vs.(104.64％±1

5、.25％)；(213.25％±15.29％) vs.(130.02％±6.82％)；(318.46％±19.86％) vs.(179.4％±9.54％)；(439.98％±24.09％) vs.(240.03％±28.07％)；P<0.05。代表成骨細(xì)胞分化能力強(qiáng)弱的茜素紅染色陽性率和代表脂肪細(xì)胞分化能力強(qiáng)弱的油紅O染色陽性率，Y-O組比O-O組均顯著增高，具體數(shù)值分別為(25.46％±1.52％)vs.(13.85％±1.69％)，P