幽門螺桿菌尿素酶B亞單位在保加利亞乳桿菌中的表達(dá)與鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的： 構(gòu)建能表達(dá)幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)尿素酶B亞單位(UreB)的基因工程乳桿菌，并對其進(jìn)行初步的安全性評估，為探索Hp感染的益生菌制劑調(diào)理療法奠定基礎(chǔ)。 方法： 1．根據(jù)GenBank已報(bào)道的Hp ureB基因的DNA序列，利用PCR引物設(shè)計(jì)和分析軟件，設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增Hp標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTC11637ureB基因，并將其克隆入乳酸菌表達(dá)質(zhì)粒載體pMG36e中構(gòu)建重組質(zhì)粒pMG3

2、6e-ureB。 2．優(yōu)化保加利亞乳桿菌(L6032)的電轉(zhuǎn)化條件，并在此條件下將重組質(zhì)粒pMG36e-ureB電轉(zhuǎn)入L6032中，篩選出轉(zhuǎn)化子L6032-UreB。 3．L6032-UreB在含乳糖的MRS培養(yǎng)基中表達(dá)抗原肽UreB，Western blot鑒定其抗原性。連續(xù)傳代培養(yǎng)60代，檢測基因工程乳桿菌L6032-UreB的形態(tài)學(xué)與生理生化特性、穩(wěn)定性以進(jìn)行初步的安全性評估。 結(jié)果： 1．成功構(gòu)建

3、了重組質(zhì)粒pMG36e-ureB，經(jīng)酶切和PCR鑒定后與預(yù)期結(jié)果完全吻合。核酸序列測定顯示插入的ureB基因序列與預(yù)期結(jié)果亦相符。 2．優(yōu)化了L6032的電轉(zhuǎn)化條件，確定了最佳參數(shù)：電壓1.9kV/cm，時(shí)間2.8ms。利用電轉(zhuǎn)化成功地將重組質(zhì)粒pMG36e-ureB導(dǎo)入L6032中。 3．SDS-PAGE結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)化子L6032-UreB能表達(dá)約64kD的蛋白，Westem blot顯示，該蛋白能與抗Hp UreB的

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