噪聲性聽力損失易感性與GSTM1、GSTT1、MtDNA和CDH23基因多態(tài)性研究.pdf

1、噪聲性聽力損失(noise-inducedhearingloss，NIHL)是最常見的職業(yè)性疾患。NIHL與噪聲暴露量呈正相關(guān)，噪聲暴露強(qiáng)度越大，暴露時(shí)間越長(zhǎng)，產(chǎn)生的聽力損失越嚴(yán)重。然而具體到每一個(gè)個(gè)體，相同的噪聲暴露量引起的聽力損失在程度上卻存在很大的差異；或者產(chǎn)生相同嚴(yán)重程度的聽力損失，易感個(gè)體與非易感個(gè)體相比需要更少的噪聲暴露量，說(shuō)明NIHL存在明顯的個(gè)體易感性差異。 造成NIHL的主要因素是噪聲暴露量，然而有相當(dāng)多的體內(nèi)

2、外因素可以影響NIHL的嚴(yán)重程度，從而造成易感性表型的差異。某些可吸入性化學(xué)毒物，如甲苯、一氧化碳與噪聲有協(xié)同作用，可以加重NIHL；某些耳毒性藥物如順鉑、氨基甙類抗生素等亦有類似作用。而機(jī)體內(nèi)在因素如低鎂、低鐵、高血脂等也會(huì)增加個(gè)體對(duì)NIHL的易感性。遺傳因素亦會(huì)影響個(gè)體對(duì)NIHL的易感性?；蚴沁z傳信息的攜帶者，隨著分子生物學(xué)技術(shù)在NIHL研究中的應(yīng)用，近年已發(fā)現(xiàn)幾種與NIHL易感性相關(guān)的基因，如：谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因(GSTM1、

3、GSTT1)、線粒體基因(MtDNA)、鈣黏素23基因(CDH23)、質(zhì)膜Ca2+-ATP酶2突變(Pmca2)、超氧化物歧化酶(Sod1)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶基因去除(GPx1)、老年性耳聾基因(Ahl)和熱休克蛋白(HSPs)基因等。 研究噪聲性聽力損失易感基因與NIHL的關(guān)系對(duì)于NIHL預(yù)防具有重要的意義。如果能確認(rèn)NIHL易感基因，就有可能在暴露于噪聲環(huán)境之前將NIHL易感個(gè)體篩選出來(lái)，有效地減少NIHL的發(fā)生，達(dá)到一級(jí)

4、預(yù)防的目的。本課題研究與NIHL相關(guān)的幾個(gè)基因，為確定這幾個(gè)基因與NIHL的關(guān)系提供一定的理論依據(jù)，為NIHL的篩查提供有價(jià)值的遺傳標(biāo)記，并為研究其它易感基因提供一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)方法指導(dǎo)。 研究目的通過(guò)病例-對(duì)照研究方法和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction，PCR)技術(shù)，了解NIHL易感性與GSTM1、GSTT1、MtDNA和CDH23基因多態(tài)性的關(guān)系。為NIHL易感個(gè)體的篩選提供基礎(chǔ)資料，更好地

5、預(yù)防NIHL的發(fā)生。 材料和方法：1.研究對(duì)象的選擇選擇噪聲暴露強(qiáng)度在75～105dB的工人為研究對(duì)象，設(shè)計(jì)調(diào)查表逐個(gè)對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行調(diào)查。 2.基因組DNA抽提采用基因組抽提試劑盒抽提外周血DNA。 3.GSTM1、GSTT1、MtDNA和CDH23基因多態(tài)性檢測(cè)利用引物設(shè)計(jì)軟件并參考文獻(xiàn)分別設(shè)計(jì)GSTM1、GSTT1、MtDNA和CDH23基因相應(yīng)位點(diǎn)的引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。以Albumin為內(nèi)對(duì)照，雙重PCR

6、方法擴(kuò)增GSTM1和GSTT1基因，鑒定基因型；采用巢式PCR方法檢測(cè)mtDNA4977缺失；常規(guī)PCR方法擴(kuò)增CDH23基因，再分別進(jìn)行限制性酶切反應(yīng)判斷CDH23-rs1227049和CDH23-rs1227051位點(diǎn)基因型。 4.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)顯著水平為0.05。噪聲累積暴露量與NIHL的量效關(guān)系、基因型頻率的組間比較用x2檢驗(yàn)；Logistic回歸分析噪聲累積暴露量與NIH

7、L的關(guān)系；多因素Logistic回歸分析方法對(duì)個(gè)體間年齡和累積噪聲暴露量等因素進(jìn)行校正。 結(jié)果：1.研究對(duì)象的一般情況本次研究共篩查出符合條件的對(duì)象254例，其中病例和對(duì)照各127例，年齡19.0～56.0(y)，平均36.1±9.3(y)；接噪工齡1～37(y)，平均11.0±7.6(y)；噪聲暴露強(qiáng)度75.0～102.0(dB)，平均90.7±8.4(dB)；累積噪聲暴露量52.3～96.1(dB)，平均79.6±8.5(d

8、B)。病例組與對(duì)照組間年齡、接噪工齡、噪聲暴露強(qiáng)度、累積噪聲暴露量差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.累積噪聲暴露量與噪聲性聽力損失的關(guān)系按照累積噪聲暴露量的大小對(duì)其進(jìn)行分級(jí)，計(jì)算不同級(jí)別下的聽力損失患病率，結(jié)果表明：隨著累積噪聲暴露量的增加，噪聲性聽力損失患病率明顯升高，由34.8％上升到70.0％，累積噪聲暴露量與噪聲性聽力損失間存在劑量-反應(yīng)關(guān)系(x2=33.3，P值＜0.05)。 3.累積噪聲暴露量、年齡與噪聲性聽力損失

9、的Logistic回歸分析對(duì)累積噪聲暴露量、年齡與噪聲性聽力損失進(jìn)行了Logistic回歸分析，結(jié)果表明：累積噪聲暴露量與噪聲性聽力損失的優(yōu)勢(shì)比為1.087，P值＜0.05，表明累積噪聲暴露量與噪聲性聽力損失間存在劑量-反應(yīng)關(guān)系；年齡與噪聲性聽力損失的優(yōu)勢(shì)比為1.041，P值＜0.05，表明年齡也是影響噪聲性聽力損失的危險(xiǎn)因素之一。 4.GSTM1、GSTT1基因與噪聲性聽力損失易感性對(duì)123例病例和123例對(duì)照進(jìn)行了GSTM1

10、基因分型，結(jié)果表明：病例組和對(duì)照組GSTM1基因缺失率分別為69.1％和56.1％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.45，P＜0.05)，攜帶GSTM1(一)基因型發(fā)生噪聲性聽力損失的危險(xiǎn)性是攜帶GSTM1(+)基因型者的1.75倍。對(duì)118例病例和114例對(duì)照對(duì)照進(jìn)行了GSTT1基因分型，結(jié)果表明：病例組和對(duì)照組GSTT1基因缺失率分別為50.8％和57.9％，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=1.16，P＞0.05)。GSTM1和GSTT1

11、聯(lián)合基因型分析表明：在增強(qiáng)噪聲性聽力損失易感性方面，GSTM1和GSTT1基因型之間可能不存在聯(lián)合作用。 5.MtDNA4977缺失與噪聲性聽力損失易感性對(duì)117例病例和122例對(duì)照進(jìn)行了mtDNA4977缺失情況檢測(cè)，結(jié)果表明：病例組和對(duì)照組的mtDNA4977缺失率分別為95.7％和95.9％，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=0.01，P＞0.05)。 6.CDH23基因與噪聲性聽力損失易感性對(duì)127例病例和127例對(duì)照進(jìn)行

12、了CDH23基因多態(tài)性檢測(cè)，結(jié)果表明：CDH23-rs1227049位點(diǎn)在病例組CC、CG和GG基因型頻率分別為39.6％、14.6％和45.8％，等位基因C和G的頻率分別為46.9％和53.1％；對(duì)照組三種基因型的頻率分別為50.9％、20.0％和29.1％，等位基因C和G的頻率分別為60.9％和39.1％。CDH23-rs1227051位點(diǎn)在病例組TT、CT和CC基因型頻率分別為82.3％、17.7％和0，等位基因T和C的頻率分別為

13、91.2％和8.8％。；對(duì)照組三種基因型的頻率分別為74.3％、25.7％和0，等位基因T和C的頻率分別為87.1％和12.9％。CDH23-rs1227049和CDH23-rs1227051位點(diǎn)的基因型分布及其等位基因頻率在病例組和對(duì)照組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值＞0.05)。多因素Logistic回歸分析方法對(duì)個(gè)體間年齡、工齡、噪聲暴露強(qiáng)度和累積噪聲暴露量等因素進(jìn)行校正后，未發(fā)現(xiàn)CDH23-rs1227049和CDH23-rs12

14、27051兩單核苷酸位點(diǎn)任一基因型噪聲性聽力損失的危險(xiǎn)性有顯著性提高(P值＞0.05)。 結(jié)論：1.隨著累積噪聲暴露量的增加，噪聲性聽力損失患病率明顯升高，累積噪聲暴露量與噪聲性聽力損失間存在劑量-反應(yīng)關(guān)系。 2.職業(yè)性噪聲暴露人群中，GSTM1基因缺失可能是發(fā)生噪聲性聽力損失的易感因素之一；而GSTT1基因缺失可能不是發(fā)生噪聲性聽力損失的易感因素之一；在增強(qiáng)噪聲性聽力損失易感性方面，GSTM1和GSTT1基因之間可能不