p16-CyclinD1-CDK4-6-pRb通路在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)及其與預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、目的:通過檢測(cè)、分析正常肺組織和非小細(xì)胞肺癌(non-smal1-cell lung cancer，NSCLC)中多腫瘤抑制基因(multipletumor-suppressor1，MTS1又稱p16)，細(xì)胞周期蛋白(CyclinD1)和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因(Retinoblastoma gene, Rb)，探討p16-CyclinD1-CDK4/6-Rb通路在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)發(fā)病機(jī)制中的作用及與預(yù)后的關(guān)系。
　　方法:運(yùn)

2、用免疫組化、分子生物學(xué)技術(shù)(PCR，PCR-SSCP，MSP，DNA測(cè)序和DPCR技術(shù)等)和病理學(xué)技術(shù)對(duì)人體正常肺組織，非小細(xì)胞肺癌癌組織中細(xì)胞周期相關(guān)基因p16，cyclinD1和Rb，從蛋白質(zhì)和DNA水平改變及其相互關(guān)系進(jìn)行研究，并結(jié)合臨床病理資料和隨訪資料進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　1.應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)p16、CyclinD1和Rb的表達(dá)，結(jié)果顯示NSCLC中p16-CyclinD1-Rb通路總異常率為97.6％(

3、82/84):p16、RB和CyclinD1的異常表達(dá)率分別為38.1％，51.2％和54.8％:提示p16-cyclinD1-Rb通路異常與NSCLC發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，三種蛋白的異?？蓡为?dú)或共同發(fā)揮作用。p16與Rb表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系(P＜0.01);而CyclinD1與RB表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05)。Rb表達(dá)與NSCLC的分化程度呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，提示其可能在腫瘤的演進(jìn)中發(fā)揮作用。
　　2.應(yīng)用PCR-SSCP,

4、 MSP和DNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)p16基因狀態(tài)。共發(fā)現(xiàn)24/76例(31.6％) LMS中有p16基因異常，其中18例(23.7％)發(fā)生啟動(dòng)子區(qū)5'CpG島甲基化，4例發(fā)生基因突變（2例在第2外顯子編碼區(qū)，2例在第2外顯子與內(nèi)含子接頭處），2例存在純合缺失。24例p16基因異常的NSCLC中p16蛋白陰性20例，弱陽性4例.研究結(jié)果提示p16基因失活與NSCLC的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。啟動(dòng)子區(qū)5'CpG島的甲基化是NSCLC中p16基因失活的主要方

5、式，但也有少量點(diǎn)突變和缺失。
　　3.應(yīng)用DPCR技術(shù)檢測(cè)CCND1基因擴(kuò)增。結(jié)果顯示16/76例(21.1％)NSCLC存在CCND1基因擴(kuò)增，均伴CyclinD1過表達(dá)。但仍有32/48例(66.7％) cyclinD1過表達(dá)的病例未檢測(cè)到CCND1擴(kuò)增。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示CCND1基因擴(kuò)增在中NSCLC較為常見，是引起CyclinD1過表達(dá)的原因之一，可能與NSCLC發(fā)病機(jī)制有關(guān)。
　　4.本研究回訪率51.2％，中位生存期

6、為24個(gè)月。采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型評(píng)估各因素。單因素分析發(fā)現(xiàn)患者年齡、腫瘤大小、分化程度、組織類型CyclinD1表達(dá)以及轉(zhuǎn)移與患者死亡率相關(guān)，是有意義的預(yù)后因素。多因素分析則僅發(fā)現(xiàn)p16表達(dá)、腫瘤大小和有無轉(zhuǎn)移是獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。P16、CyclinD1和Rb聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC進(jìn)展及預(yù)后的評(píng)估有一定的臨床價(jià)值。
　　結(jié)論:p16-cyclinD-pRB通路異常與NSCLC發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。啟動(dòng)子區(qū)5'CpG島甲基化是NSCL