肝復(fù)康膠囊對(duì)四氯化碳及氨基半乳糖所致肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)的目的是探討肝復(fù)康膠囊對(duì)四氯化碳及氨基半乳糖所致肝損傷的保護(hù)作用，以及對(duì)急性肝損傷可能的保護(hù)機(jī)制。 研究方法： 1.肝復(fù)康膠囊對(duì)CCl4所致肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究。取昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重18～22g，采用隨機(jī)抽樣的方法，分成六組，每組10只，即空白對(duì)照組(A組)，肝損傷模型組(B組)，陽(yáng)性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯組(C組)，肝復(fù)康膠囊三個(gè)劑量組：小劑量組(D組)，中劑量組(E組)，大劑量組(F組)。以上各組均灌胃給藥，

2、A，B組：給以生理鹽水，C組：聯(lián)苯雙酯200mg/kg.d，D組：肝復(fù)康0.9g/kg.d，E組：肝復(fù)康1.8g/kg.d，F(xiàn)組：肝復(fù)康3.6g/kg.d，一天一次，連續(xù)7天，于末次給藥后1小時(shí)，除空白對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射0.1％四氯化碳(CCl4)10ml/kg，空白對(duì)照組腹腔注射等量豆油。24小時(shí)后測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)，測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)前自由飲水，禁食12小時(shí)。①摘取眼球取血，賴氏法測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(A

3、ST)。②每只小鼠取肝左葉部位大致相同的一小塊肝組織約0.5cm3，固定于Bone氏液中，制成石蠟切片，HE染色，作病理切片檢查。病理評(píng)估方法：(一)正常肝細(xì)胞。(+)肝細(xì)胞變性呈點(diǎn)狀壞死。(++)肝細(xì)胞變性呈灶性壞死，或病變的肝細(xì)胞小于肝小葉的1/3。(+++)肝小葉1/3～2/3肝細(xì)胞壞死。(++++)肝小葉超過(guò)2/3的肝細(xì)胞壞死。③取肝右葉組織塊，于冰冷的PBS液沖洗后稱重，4℃下用勻漿器研磨成10％組織勻漿，于4000r/min

4、離心10min，取上清液，檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)水平。所有結(jié)果均采用Excel軟件提供的兩組間t檢驗(yàn)和方差分析方法，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，等級(jí)資料用秩和檢驗(yàn)。 2.肝復(fù)康膠囊對(duì)D-GalN所致肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究。取昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重18～22g，采用隨機(jī)抽樣的方法，分成六組，每組10只，即空白對(duì)照組(A組)，肝損傷模型組(B組)，陽(yáng)性對(duì)照藥聯(lián)苯雙酯組(C組)，肝復(fù)

5、康膠囊三個(gè)劑量組：小劑量組(D組)，中劑量組(E組)，大劑量組(F組)。以上各組均灌胃給藥，A，B組：給以生理鹽水，C組：聯(lián)苯雙酯200mg/kg.d，D組：肝復(fù)康0.9g/kg.d，E組：肝復(fù)康1.8g/kg.d，F(xiàn)組：肝復(fù)康3.6g/kg.d一天一次，連續(xù)7天，于末次給藥后1小時(shí)，除空白對(duì)照組外，其余各組均給予10％D-氨基半乳糖(生理鹽水配制)，按照800mg/kg腹腔注射，空白對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水，24小時(shí)后測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)，

6、測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)前禁食12小時(shí)，自由飲水。①摘取眼球取血，賴氏法測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)。②每只小鼠取肝左葉部位大致相同的一小塊肝組織約0.5cm3，固定于Bone氏液中，制成石蠟切片，HE染色，作病理切片檢查。病理評(píng)估方法：(一)正常肝細(xì)胞。(+)肝細(xì)胞變性呈點(diǎn)狀壞死。(++)肝細(xì)胞變性呈灶性壞死，或病變的肝細(xì)胞小于肝小葉的1/3。(+++)肝小葉1/3～2/3肝細(xì)胞壞死。(++++)肝小葉超過(guò)2/3的肝細(xì)胞壞

7、死。采用Excel軟件提供的兩組間t檢驗(yàn)和方差分析方法，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。 研究結(jié)果： 1.肝復(fù)康膠囊對(duì)CCl4所致肝損傷小鼠肝功能的影響。 1.1.對(duì)ALT活性的影響：模型組小鼠ALT含量(250.6±29.9U)顯著高于正?？瞻捉M(39.2±8.26U)(P＜0.01)，提示肝損傷模型復(fù)制成功。肝復(fù)康膠囊0.9g/kg、1.8g/kg和3.6g/kg能明顯降低CCl4損傷小鼠血清ALT活性，分別為：142±12

8、.7U、121.4±13U和105.5±11U，顯著低于模型對(duì)照組(P＜0.01)。表明肝復(fù)康膠囊小、中、大劑量均能降低CCl4肝損傷小鼠血清ALT的作用。 1.2.對(duì)AST活性的影響：與空白對(duì)照組AST活性(397.4±23.5U)比較，模型組(488.2±19.5U)明顯升高(P＜0.01)，與模型組比較，肝復(fù)康組的AST活性顯著降低，分別為436±27.8U、426.9±15.1U和454.1±24.2U(P＜0.01)。

9、 2.肝復(fù)康膠囊對(duì)CCl4所致肝損傷小鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)的影響。光鏡下：正常對(duì)照組可見肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，未見纖維化及肝細(xì)胞壞死，肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)清晰，圍繞中央靜脈呈放射狀排列；CCl4損傷組可見肝臟正常結(jié)構(gòu)被破壞，肝小葉排列紊亂，肝細(xì)胞邊界不清楚，胞漿疏松，肝竇受壓變窄，肝細(xì)胞大量變性壞死，有氣球樣變或嗜酸性變，匯管區(qū)大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)且有大量的膠原纖維增生。經(jīng)秩和檢驗(yàn)，模型組肝損傷程度較正常對(duì)照組，顯著為重(P＜0.05

10、)。肝復(fù)康各劑量組可見肝小葉結(jié)構(gòu)大致正常，肝細(xì)胞變性壞死情況較輕，與模型組比較肝臟病理改變有顯著改善(P＜0.05)。 3.肝復(fù)康膠囊對(duì)CCl4所致肝損傷小鼠肝組織勻漿MDA(丙二醛)、SOD(超氧化物歧化酶)和GSH-Px(谷胱甘肽過(guò)氧化物酶)的影響。 3.1.對(duì)MDA含量(nmol/mgprot)的影響：與空白對(duì)照組(5.86±0.95)比較，肝損傷組的MDA含量(14.63±2.67)顯著升高(P＜0.01)；而肝

11、復(fù)康各劑量(9.35±1.76；6.92±1.63；9.56±1.83)均能有效改善CCl4所致的MDA含量升高(P＜0.01)。 3.2.對(duì)SOD活性(U/mgprot)的影響：與空白對(duì)照(3.62±0.36)比較，肝損傷組的SOD活性(2.03±0.40)顯著降低(P＜0.01)；而肝復(fù)康各劑量(2.66±0.08、3.23±0.49、3.10±0.23)均能改善CCl4所致的SOD活性降低(P＜0.05，P＜0.01，P＜

12、0.01)。 3.3.對(duì)GSH-Px活性的影響：與空白對(duì)照(29.66±0.68U)比較，肝損傷組的GSH-Px活性(16.51±0.54U)顯著降低(P＜0.01)；而肝復(fù)康各劑量(19.47±0.15U、29.92±0.21U、28.46±0.63U)均能有效改善CCl4所致的GSH-Px活性降低(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01)。 4.肝復(fù)康膠囊對(duì)D-GalN所致肝損傷小鼠肝功能的影響。 4.1.

13、對(duì)ALT活性的影響：模型組小鼠ALT活性(195±13.1U)顯著高于正?？瞻捉M(32.1±4.6U)(P＜0.01)，說(shuō)明D-GalN肝損傷模型復(fù)制成功。肝復(fù)康膠囊0.9g/kg、1.8g/kg和3.6g/kg均能明顯降低D-GalN損傷小鼠血清ALT活性，分別為：154.8±12.9U、140.8±24.1U和180.3±15.1U，顯著低于模型組(P＜0.01)。表明肝復(fù)康膠囊、中、大劑量均能顯著改善D-GalN所致小鼠肝損傷。

14、 4.2.對(duì)AST活性的影響：與空白對(duì)照組AST活性(296.4±15.2U)比較，模型組的AST活性(367±18.2U)明顯升高(P＜0.01)，肝復(fù)康組的AST活性分別為323.2±31.1U、320.5±18.4U和323.6±16.9U，顯著低于模型組(P＜0.01)。進(jìn)一步表明本膠囊可有效改善D-GalN所致小鼠肝損傷。 5.肝復(fù)康膠囊對(duì)D-GalN所致肝損傷小鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)觀察。光鏡下：正常對(duì)照組可見肝細(xì)胞

15、圍繞中央靜脈呈放射狀排列，肝細(xì)胞大小正常，肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)完整；D-GalN損傷組：全組動(dòng)物均顯示中毒性肝損傷病理改變，肝細(xì)胞發(fā)生廣泛的水樣，胞漿疏松及混濁腫脹，肝細(xì)胞可見點(diǎn)狀和灶性壞死，可見核分裂，嗜酸性小體及脂肪變，匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組肝損傷較正常對(duì)照為重(P＜0.05)。肝復(fù)康各組及聯(lián)苯雙脂組僅個(gè)別肝細(xì)胞出現(xiàn)混濁腫脹，與模型組比較，肝臟病理有明顯改善。 研究結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：肝復(fù)康膠囊能明顯的降低