脫氫卡維汀對四氯化碳致大鼠肝損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的:觀察脫氫卡維汀(DC)對四氯化碳(CCl4)致雄性SD大鼠急性肝損傷及慢性肝纖維化的保護作用,并探討其可能的分子機制。 方法:采用CCl4作為肝損傷造模劑,急性肝損傷預(yù)防試驗中,分為溶劑對照組(ig植物油+ip生理鹽水)、模型對照組(ig CCl4+ip生理鹽水)、DC高劑量組(ig CCl4+ip DC 1mg/kg)、DC低劑量組(ig CCl4+ip DC 0.5 mg/kg)、甘草酸二銨(glycyrrhizin,

2、GH)組(ig CCl4+ip GH 20 mg/kg)及DC單獨給藥組(ig植物油+ip DC 1 mg/kg),給藥組大鼠在CCl4染毒前的48h、24h和2h分別腹腔注射(intraperitoneal injection,ip)DC或GH;急性肝損傷治療試驗中,分為溶劑對照組(ig植物油+ip生理鹽水)、模型對照組(ig CCl4+ip生理鹽水)、DC高劑量組(ig CCl4+p DC 1 mg/kg)、DC低劑量組(ig CC

3、l4+ip DC0.5 mg/kg)、GH組(ig CCl4+ip GH 20 mg/kg)及DC單獨給藥組(ig植物油+ip DC 1mg/kg),大鼠在CCl4染毒后的2h、24h和48h分別ip DC或GH;肝纖維化治療試驗中,大鼠灌胃(ig)CCl4 12周建立肝纖維化模型,給藥組從第5周開始ip DC進行治療,3次/周,至12周末結(jié)束給藥。各組大鼠均在給藥結(jié)束后,腹腔戊巴比妥鈉麻醉,隨即腹主動脈采血檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT

4、)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、堿性磷酸酶(ALP)及總膽紅素(TBIL)等生化指標(biāo)。取大鼠肝組織作病理組織學(xué)檢查并檢測其中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)等抗氧化酶活性和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)水平。其中,肝纖維化研究中,各組大鼠在末次給藥后放于代謝籠中收集24h尿液,分別測定肝纖維化大鼠肝組織和尿液中羥脯氨酸(HYP)含量。纖維化肝組織作天狼猩紅特殊病理染色,運用基因芯片技術(shù)研究肝

5、纖維化相關(guān)基因如細胞周期基因、細胞生長增殖和分化相關(guān)基因、熱休克蛋白相關(guān)基因、轉(zhuǎn)錄因子和調(diào)控因子相關(guān)基因等的變化,并通過逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)驗證基因芯片的部分結(jié)果。 結(jié)果:DC能顯著降低急慢性肝損傷大鼠血清ALT、AST和TBIL等生化指標(biāo)的水平；顯著降低肝組織內(nèi)MDA的水平,并顯著提高肝組織內(nèi)抗氧化酶的活性；急性肝損傷和肝纖維化H&E病理學(xué)染色評分DC組顯著低于陽性對照組；DC長期給藥后可減輕CCl4所致的大鼠肝纖維化程度,肝組織

6、內(nèi)HYP的含量及天狼猩紅肝臟膠原顯色的病理評分也較陽性對照組顯著降低；DC對CCl4引起的肝纖維化相關(guān)基因變化有著較強調(diào)控作用,可顯著下調(diào)細胞周期基因中Cdk2、Cdk4、Cdkn1b和Cdkn2a;顯著下調(diào)細胞生長、增殖和分化相關(guān)基因Mdm2的表達,并能顯著上調(diào)Bcr的表達；顯著下調(diào)Transporters相關(guān)基因中Abcb1、Abcg2和Rad50的表達；顯著下調(diào)熱休克蛋白相關(guān)基因中的Dnajb5、Dnajb6和Dnajc5的表達；

7、顯著下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子和調(diào)控因子相關(guān)基因Amt、Rarg和Nfkb2的表達：并可顯著下調(diào)其他相關(guān)基因中5SrRNA、BAS2C、Bche、Grp58和Nrli3的表達,對Itgb1具有顯著上調(diào)作用。用RT-PCR驗證了DC對肝纖維化相關(guān)基因IL18、BcL2、Rad50和Cyp3a13的調(diào)控影響。 結(jié)論：DC通過降低CCl4致急性肝損傷大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激的水平,對大鼠急性肝損傷起到預(yù)防和治療作用；DC通過降低CCl4致慢性肝纖維化大鼠體