負(fù)載人生存素多表位基因的Ⅰ型極化樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗治療乳腺癌的實驗研究.pdf

1、目的：構(gòu)建負(fù)載人生存素(survivin)的多表位基因Ⅰ型極化樹突狀細(xì)胞腫瘤疫苗，體外實驗觀察疫苗的抗乳腺癌活性。
　　方法：從乳腺癌患者外周血提取單核細(xì)胞，體外培養(yǎng)分化出人樹突狀細(xì)胞(DC)，將DC分為兩組，其中一組加入1L-1β、TNF-α、IL-6、PGE2刺激DC成熟(sDCs)；另一組加入IFN-α、IFN-γ、poly-I：C、IL-1β、TNF-α刺激DC極化(αDCs)。運用流式細(xì)胞儀分別檢測兩種DC表面共刺激分子

2、CD80、CD86表達(dá)情況。將空質(zhì)粒pIRESneo3.0、含survivin(4)的pIRESneo3.0質(zhì)粒以及含survivin(4)/Th的pIRESneo3.0質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染兩組DC，制備DC疫苗。DC疫苗與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，ELISA法檢測上清中IFN-γ的含量。效應(yīng)T淋巴細(xì)胞與靶細(xì)胞MCF-7共孵育，CCK-8法檢測CTL對靶細(xì)胞的殺傷率；流式細(xì)胞儀檢測靶細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：經(jīng)流式細(xì)胞儀顯示兩組DC均高表達(dá)CD

3、80、CD86，且αDCs組的表達(dá)水平明顯高于sDCs組；人外周血T淋巴細(xì)胞高表達(dá)CD4、CD8a；αDCs-survivin(4)/Th組及αDCs-survivin(4)組的IFN-γ的含量分別為(318.05±17.72)pg/ml、(235.39±12.06)pg/ml，明顯高于sDCs-survivin(4)/Th組(61.50±5.54)pg/ml及sDCs-survivin(4)組(44.01±2.55)pg/ml，P<0

4、.05；αDCs組對MCF-7細(xì)胞的殺傷率明顯高于sDCs相應(yīng)各組，P<0.05，survivin(4)/Th組的MCF-7細(xì)胞的殺傷率明顯高于survivin(4)組、空質(zhì)粒組、未轉(zhuǎn)染DC與T細(xì)胞共培養(yǎng)組和單獨T淋巴細(xì)胞組，P<0.05；DC疫苗作用后αDCs-survivin(4)/Th組的MCF-7細(xì)胞的凋亡率(20.45±3.09)％高于αDCs-survivin(4)組(14.66±1.26)％，P<0.05，亦明顯高于sDC