洋蔥中蒜氨酸酶的分離純化及其酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、本論文對(duì)洋蔥中的蒜氨酸酶進(jìn)行了分離純化，對(duì)蒜氨酸酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步研究，并利用提取的蒜氨酸酶與洋蔥中其底物進(jìn)行反應(yīng)，產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.通過硫酸銨沉淀的實(shí)驗(yàn)，采用飽和度為30％-65％的硫酸銨對(duì)洋蔥中蒜氨酸酶粗提液進(jìn)行分級(jí)沉淀，純化倍數(shù)為1.58倍；通過Sephacryl S-200HR柱層析，得到純化倍數(shù)為1.65的蒜氨酸酶；經(jīng)過Con A-Sepharose 4B親和層析透析處理，最終得到純化

2、倍數(shù)為8.05的精提蒜氨酸酶。純化后，回收率為49.5％。 2.通過聚丙烯酰胺凝膠電泳，測(cè)定洋蔥中蒜氨酸酶亞基分子量為50.2kD。 3.在對(duì)洋蔥中蒜氨酸酶部分純化的基礎(chǔ)上，測(cè)定其最適pH、最適反應(yīng)溫度、輔酶因子以及其他金屬離子對(duì)酶活性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在給定的反應(yīng)條件下，蒜氨酸酶最適pH為8.5，最適溫度為35℃。離子濃度為10mM時(shí)，F(xiàn)e<'2+>對(duì)蒜氨酸酶具有顯著的促進(jìn)作用，Mn<'2+>、Cu<'2+>次之；