老瓜頭效毒成分7-脫甲氧基娃兒藤堿富集及醋制降毒機(jī)制初步研究.pdf

1、目的：從老瓜頭干燥全草70％乙醇提取物中富集鎮(zhèn)痛效-毒成分7-脫甲氧基娃兒藤堿（7-Demethoxylophorine，DEM），并優(yōu)化提取工藝；通過比較醋制前后主要毒性成分揮發(fā)油及DEM的變化，為進(jìn)一步深入闡述老瓜頭醋制降毒機(jī)理奠定基礎(chǔ)；以DEM為指標(biāo)，優(yōu)化老瓜頭醋制降毒工藝條件，保證臨床用藥安全。
　　方法：70%乙醇微波萃取老瓜頭全草16.8 Kg，回收溶劑后，浸膏上001×7型陽離子交換樹脂，富集總生物堿，再經(jīng)由硅膠、S

2、ephadex LH-20等各種色譜技術(shù)分離純化生物堿，利用1H-NMR、13C-NMR和2D-NMR對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，尋找目標(biāo)化合物。建立DEM的 HPLC-UV含量測定方法，以其含量為考察指標(biāo)，采用四因素三水平 L9（34）正交設(shè)計優(yōu)化其提取工藝。以建立的HPLC-UV方法，測定并比較生品與醋制品（陳醋、白醋）甲醇提取物中DEM的含量差異，采用GC-MS對石油醚及二氯甲烷萃取物進(jìn)行成分分析。以DEM含量為考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計L16

3、（45）優(yōu)化其醋制工藝。
　　結(jié)果：
　　1.共富集得到總生物堿236.5 g，得率為1.41%，并從總生物堿中分離得到1個生物堿單體（200 mg），經(jīng)鑒定為目標(biāo)化合物，得率約為0.25%；
　　2.建立了 DEM的 HPLC-UV含量測定方法，專屬性強(qiáng)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸Y=93649X-20052（r=0.9999），在0.11~70.4μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，LLOQ為110 ng/mL，LLOD為33

4、.3 ng/mL。日內(nèi)、日間精密度及重復(fù)性符合測定要求。
　　3.采用正交設(shè)計優(yōu)選的最佳提取工藝為：選用1:10的料液比，80%甲醇超聲提取30 min，驗證實驗測得DEM含量為（348.27±2.8）μg/g（RSD＝0.8%，n=3），高于原有試驗值。
　　4.陳醋、白醋制品DEM的含量分別較生品顯著降低了0.23倍、0.18倍（P<0.01，n=6），陳醋制品比白醋制品下降得更多（P<0.01，n=6）。
　　G

5、C-MS分析結(jié)果顯示不同炮制品揮發(fā)性成分（石油醚提取物）組成基本一致，但醋制后相同組份的峰面積大多明顯減小，白醋制品散失最多。陳醋制品二氯甲烷萃取物較生品變化較大，有生品中不含或極微量的成分產(chǎn)生或增加。
　　5.醋制工藝優(yōu)化結(jié)果表明，炮制用醋的濃度對 DEM含量影響顯著（P<0.05），通過極差直觀分析和方差分析結(jié)果，確定最佳炮制工藝為 A1B4C1D1，即采用稀釋為30%醋液，浸泡藥材24 h，60℃烘制40 min。