豬胰高血糖素樣肽-2-PLGA微球的制備及其對(duì)小鼠、斷奶仔豬腸道損傷修復(fù)效果的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、豬胰高血糖素樣肽-2(pGLP-2)能夠特異性地促進(jìn)腸黏膜生長(zhǎng),加速損傷修復(fù),為治療“仔豬斷奶綜合癥”提供了新的途徑,但pGLP-2易被二肽酰肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)快速降解,嚴(yán)重制約了其應(yīng)用,亟需研發(fā)延長(zhǎng)其半衰期的技術(shù)。本文采用聚乳酸羥基乙酸聚合物(PLGA)包被pGLP-2制成PLGA/pGLP-2微球載藥系統(tǒng),延長(zhǎng)了pGLP-2在體內(nèi)的釋放時(shí)間,并在小鼠及仔豬試驗(yàn)中取得了較好的腸道修復(fù)效果。
  試驗(yàn)一:pGLP-2/PLGA微

2、球的制備
  本試驗(yàn)探究了復(fù)乳法(W/O/W)及水包油包固體法(S/O/W)制備出微球的區(qū)別;優(yōu)化了S/O/W法制備微球的工藝;研究了在外水相加入NaCl及油相添加聚乙二醇(PEG)對(duì)微球內(nèi)藥物釋放的影響。結(jié)果表明:(1)S/O/W法較W/O/W法制備的微球載藥量相近,但粒徑較均一,突釋低,且表面圓整光滑,無(wú)較大微孔。(2)使用S/O/W法制備微球,優(yōu)選出了理論載藥量為1%、轉(zhuǎn)速為2000 rpm、PVA濃度為2%、PLGA濃度為

3、100 mg/mL、DCM/DMSO體積比為40作為制備工藝,制備出包封率為72%、突釋率為16.62%、粒徑為37.5μm的微球。(3)在油相添加10%PEG會(huì)增加微球表面孔徑及微球粒徑,加速藥物的釋放,突釋較高。外水相添加5%NaCl能降低微球粒徑及突釋?zhuān)珜?duì)藥物釋放無(wú)明顯改變,在外水相中添加5%NaCl的同時(shí)在油相中添加10%PEG能在加速藥物釋放的同時(shí)不顯著提高突釋。
  小結(jié):采用S/O/W法優(yōu)化工藝后制備出的微球包封率

4、為72%、突釋率為16.62%、粒徑為37.5μm,添加NaCl和PEG能加速微球的藥物釋放,使其在體外穩(wěn)定釋放9天以上。
  試驗(yàn)二:pGLP-2/PLGA微球?qū)SS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠損傷修復(fù)的研究
  本試驗(yàn)選取30只雄性BALB/C小鼠按體重隨機(jī)分為對(duì)照組、葡聚糖硫酸鈉組(DSS組)、微球組。對(duì)照組每日飲用蒸餾水,第一天腹腔注射300μL生理鹽水;DSS組每日飲用4%DSS,第一天腹腔注射300μL生理鹽水;微球組每日飲

5、用4%DSS,第一天腹腔注射300μL含10 mg微球的生理鹽水。試驗(yàn)第10天小鼠稱(chēng)重后屠宰,采血,分離血清,測(cè)定測(cè)量小腸及結(jié)腸長(zhǎng)度、稱(chēng)重;取2份十二指腸、結(jié)腸樣品,1份中性甲醛固定,進(jìn)行常規(guī)石蠟切片,HE染色;另1份提取RNA,進(jìn)行RT-PCR。結(jié)果表明:(1) DSS組較對(duì)照組小鼠體重、結(jié)腸長(zhǎng)度、十二指腸絨毛高度及絨毛隱窩比顯著降低;注射一次pGLP-2微球能顯著抑制DSS引起的體重降低、結(jié)腸長(zhǎng)度變短,且小鼠小腸重量較對(duì)照組和DSS

6、組顯著提高,結(jié)腸重量較對(duì)照組顯著提高。(2)飲用DSS能顯著增加小鼠體內(nèi)炎癥,注射一次pGLP-2微球能抑制DSS引起的小鼠結(jié)腸炎性評(píng)分的升高及結(jié)腸內(nèi)炎性因子IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表達(dá)的增加。(3) DSS能破壞小鼠腸道完整性,注射一次pGLP-2微球能抑制由DSS引發(fā)的血液DAO含量、結(jié)腸MPO含量、結(jié)腸Claudin-1mRNA表達(dá)的增加及結(jié)腸Occludin、ZO-1 mRNA表達(dá)的降低。
 

7、 小結(jié):一次注射pGLP-2/PLGA微球能顯著抑制由DSS引發(fā)的體增重降低,結(jié)腸變短,腸道屏障破壞及體內(nèi)炎癥增加等不良影響。
  試驗(yàn)三:pGLP-2/PLGA微球?qū)PS誘導(dǎo)斷奶仔豬腸道損傷的保護(hù)作用
  本試驗(yàn)選取18頭斷奶仔豬,按體重隨機(jī)分為對(duì)照組、脂多糖組(LPS組)、微球組。對(duì)照組于第1天、第8天注射2 mL生理鹽水;LPS組于第1天注射2 mL生理鹽水,第8天腹腔注射100μg/kg BW的LPS;微球組于第1

8、天注射100 mg按理論載藥量為2%制備的微球,第8天腹腔注射100μg/kg BW的LPS。注射LPS3 h后,將仔豬屠宰,取注射LPS前后血液測(cè)定IL-6、IgA、DAO等指標(biāo);取十二指腸、空腸、回腸,一份用中性甲醛固定,進(jìn)行常規(guī)石蠟切片,HE染色;一份提取RNA,進(jìn)行RT-PCR。結(jié)果表明:(1) LPS組較對(duì)照組仔豬十二指腸、空腸的絨毛高度及絨毛隱窩比顯著降低,微球組較LPS組仔豬十二指腸絨毛隱窩比顯著提高,微球組回腸絨毛高度及

9、絨毛隱窩比LPS組及對(duì)照組顯著提高。(2)注射LPS后LPS組仔豬血液IL-6、IgA、DAO的含量顯著提高,而pGLP-2微球預(yù)處理的仔豬在注射LPS前以上血液指標(biāo)無(wú)顯著變化。(3) LPS組較對(duì)照組空腸Occludin mRNA表達(dá)顯著降低,Clauidin-1、IL-8、TNF-α mRNA表達(dá)顯著增加,微球組較LPS組仔豬十二指腸ZO-1 mRNA顯著提高,空腸IL-8 mRNA表達(dá)顯著降低。
  小結(jié):注射一次pGLP-

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