胰高血糖素樣肽-2對(duì)大鼠阿霉素化療的腸屏障的保護(hù)作用.pdf

1、目的：化療是腫瘤治療的一項(xiàng)重要的輔助方法，但它對(duì)腸道黏膜的損傷卻是一種常見的化療導(dǎo)致的消化道不良反應(yīng)。嚴(yán)重的黏膜損害可導(dǎo)致腸屏障功能障礙。黏膜屏障損傷臨床表現(xiàn)為黏膜炎、腹瀉、潰瘍、腹痛、營(yíng)養(yǎng)不良，甚至繼發(fā)菌血癥、感染性休克、多器官功能障礙等。黏膜炎為一種常見推遲化療進(jìn)行的原因，致使化療周期的延長(zhǎng)，大大增加了感染和出血發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，最終導(dǎo)致癌癥患者死亡率增高。同時(shí)亦是增加了醫(yī)療的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，可見研究有效的防治腸黏膜損傷的方法，解決化療導(dǎo)致的腸

2、屏障損傷具有臨床意義。
　　 胰高血糖素樣肽-2(Glucagon-like peptide-2，GLP-2)是近些年發(fā)現(xiàn)的腸上皮特異性生長(zhǎng)因子，是腸道內(nèi)分泌L細(xì)胞內(nèi)胰高血糖素原基因特異性表達(dá)后的產(chǎn)物。區(qū)別于其他的多肽類生長(zhǎng)因子的是，GLP-2的作用具有腸道特異性。國(guó)外一些研究認(rèn)為，GLP-2能促進(jìn)正常小腸黏膜生長(zhǎng)，增強(qiáng)腸道屏障功能，并在動(dòng)物模型中驗(yàn)證了它能促進(jìn)炎性腸病、短腸綜合癥、腸缺血再灌注、放射腸炎及胰腺炎的腸黏膜損傷的修

3、復(fù)和愈合；國(guó)內(nèi)也有研究發(fā)現(xiàn)GLP-2對(duì)小腸移植的小鼠腸黏膜有促進(jìn)恢復(fù)及生長(zhǎng)的作用；還有的研究發(fā)現(xiàn)GLP-2的作用效果顯著強(qiáng)于其他的生長(zhǎng)因子，目前GLP-2治療潰瘍性結(jié)腸炎和短腸綜合癥分別進(jìn)行了Ⅱ期和Ⅲ期臨床實(shí)驗(yàn)。上述優(yōu)點(diǎn)顯示了GLP-2在防治腸黏膜損傷性疾病中良好的臨床應(yīng)用前景。
　　 阿霉素（Doxorubiein，Adriamycin，ADM）是一種廣泛應(yīng)用于臨床的化療藥物，對(duì)多種腫瘤有較強(qiáng)的敏感性，可是也常伴有腸道損傷的不

4、良副反應(yīng)。并且在追求臨床療效增大化療劑量時(shí)，愈是加重了腸黏膜的損傷。本實(shí)驗(yàn)選用高劑量阿霉素誘導(dǎo)大鼠的化療模型，評(píng)估GLP-2對(duì)化療大鼠的腸黏膜及屏障功能損傷的影響，驗(yàn)證Glp-2的保護(hù)作用，探求化療引起的腸黏膜損傷防治的新方法。
　　 方法：健康近交系雄性Wistar大鼠24只，體重220-250g之間，隨機(jī)分成4組，每組6只。A組：空白對(duì)照組(Control)；B組：胰高血糖素樣肽-2對(duì)照組(GLP-2)；C組：阿霉素化療組(

5、ADM)；D組：阿霉素化療＋胰高血糖素樣肽-2治療組(ADM+GLP-2)。各組大鼠每日稱重，對(duì)B組、D組的大鼠進(jìn)行GLP-2給藥，GLP-2溶于0.0lmol/LPBS，按250μg/kg/d，每日2次皮下注射，連續(xù)3天。對(duì)C組、D組的大鼠腹腔化療，阿霉素溶于生理鹽水，按20mg/kg，于第一天一次性腹腔內(nèi)注射。對(duì)A組對(duì)照注射同GLP-2等量的PBS緩沖液，每日2次皮下注射，連續(xù)3天。第4天，各組稱重后，斷頭處死全部大鼠，采集血液標(biāo)本

6、測(cè)血中二胺氧化酶(diamine oxidase，DAO)含量；無菌操作取腸系膜淋巴結(jié)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)算每克組織中菌落數(shù)(colony forming unit，CFU)比較其細(xì)菌移位；制作小腸組織勻漿，化學(xué)法檢測(cè)小腸黏膜的丙二醛(malondialdehyde，MDA)及髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)含量；取小腸組織制作石蠟切片，HE染色觀察小腸形態(tài)學(xué)改變并測(cè)量小腸絨毛高度及小腸隱窩深度；對(duì)

7、比各組間大鼠用藥前后體重的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、各組間用藥前后體重的比較：四組大鼠的體重均表現(xiàn)降低，C組的體重下降明顯高于A組的體重的下降(21.25±6.44g比4.27±10.44g，P＜0.05)；D組的體重下降明顯高于A組的體重的下降（18.43±4.32g比4.27±10.44g，P＜0.05）；D組的體重下降低于C組的體重的下降，但差異無顯著性。
　　 2、各組間形態(tài)學(xué)的比較：C組小腸的絨毛

8、高度和隱窩深度較A組顯著降低（絨毛高度143.92±24.13μm比231.95±83.81μm，P＜0.05;隱窩深度51.12±16.28μm比85.36±33.22μm，P＜0.05);D組、B組較C組的絨毛高度的顯著增高(253.24±17.45μm和251.27±63.33μm比143.92±24.13μm，P＜0.01)。D組、B組較C組隱窩深度顯著加深(84.17±5.85μm和89.83±16.01μm比51.12±16

9、.28μm，P＜0.05)。
　　 3、各組間血漿中二胺氧化酶(DAO)含量的比較：C組血中DAO含量較A組的顯著升高（85.12±14.78U/L比63.15±22.64U/L，P＜0.01），D組血中DAO含量較C組的顯著降低（56.07±12.26U/L比85.12±14.78U/L，P＜0.05）。
　　 4、各組小腸黏膜中丙二醛(MDA)含量的比較：C組MDA含量較A組、B組顯著升高（1.83±0.57nmol

10、/mgprot比0.42±0.06nmol/mgprot和0.40±0.37nmol/mgprot，P＜0.01），D組MDA含量較C組顯著降低(0.74±0.49nmol/mgprot比1.83±0.57nmol/mgprot,P＜0.01)。
　　 5、各組小腸黏膜中髓過氧化物酶(MPO)活力的比較：C組MPO活力較A組、B組顯著升高（0.78±0.29單位/克濕片比0.24±0.16單位/克濕片和0.28±0.08單位/克

11、濕片，P＜0.01），D組MPO活力較C組顯著降低(0.47±0.09單位/克濕片比0.78±0.29單位/克濕片，P＜0.05)。
　　 6、各組間腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌移位的比較：C組的腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌培養(yǎng)的細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)(CFU)較A組、B組顯著升高(38.33±20.41比10.00±10.00和13.33±5.77，P＜0.05)，D組CFU數(shù)較C組的顯著降低(7.50±9.57比38.33±20.41,P＜0.01)。