乳頭狀甲狀腺癌中炎性因子通過誘導(dǎo)FAT10過表達(dá)而導(dǎo)致染色體不穩(wěn)定的機(jī)制研究.pdf

1、目的
　　探討在乳頭狀甲狀腺癌標(biāo)本中FAT10的表達(dá)情況。研究FAT10過表達(dá)對人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞染色體穩(wěn)定性的影響及對其抗凋亡及集落形成能力的影響。觀察TNF-α和IFN-γ通過誘導(dǎo)人乳頭狀甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞中FAT10的表達(dá)而導(dǎo)致染色體核型異常的現(xiàn)象。解析TNF-α/FAT10路徑調(diào)控甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展進(jìn)程的分子機(jī)制，進(jìn)一步尋找有效的治療靶標(biāo)。
　　方法
　　應(yīng)用免疫組化的方法檢測FAT10在乳頭狀甲狀腺癌和正

2、常甲狀腺組織標(biāo)本中的表達(dá)情況。采用脂質(zhì)體法用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染pcDNA3-FAT10質(zhì)粒進(jìn)TPC-1細(xì)胞，采用G418進(jìn)行篩選，建立穩(wěn)定過表達(dá)FAT10的人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞株。并采用電穿孔法將FAT10siRNA轉(zhuǎn)染人TPC-1細(xì)胞，F(xiàn)AT10干擾組及陰性對照組電穿孔轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，給予50ng/ml的TNF-α和50U/ml的IFN-γ刺激8小時(shí)，用Westernblot檢測各組細(xì)胞中的FAT10表達(dá)水平。采用

3、冷片法滴片，Giemsa染液染色的方法進(jìn)行染色體核型分析，分析FAT10過表達(dá)及TNF-α和IFN-γ誘導(dǎo)TPC-1細(xì)胞出現(xiàn)非整倍體的現(xiàn)象。應(yīng)用AnnexinⅤ凋亡試劑盒檢測FAT10過表達(dá)對TPC-1抗凋亡能力的影響。通過集落形成實(shí)驗(yàn)觀察其集落形成能力的變化。
　　結(jié)果
　　免疫組化結(jié)果顯示，乳頭狀甲狀腺癌組織中的FAT10高表達(dá)的陽性率高于正常甲狀腺組織。Westernblot結(jié)果顯示FAT10過表達(dá)組細(xì)胞FAT10蛋白

4、水平明顯高于空白對照組和陰性對照組，F(xiàn)AT10過表達(dá)的人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞株組出現(xiàn)非整倍體形象，并且抗喜樹堿誘導(dǎo)凋亡的能力和集落形成能力顯著高于對照組。人乳頭狀甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞經(jīng)TNF-α和IFN-γ誘導(dǎo)后與空白對照組和陰性對照組相比過表達(dá)FAT10，并有劑量依賴關(guān)系。FAT10siRNA干擾可以有效抑制TNF-α和IFN-γ誘導(dǎo)的人乳頭狀甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞中FAT10的表達(dá)，并且通過抑制FAT10表達(dá)，可以有效抑制TNF-α