流體剪切力對MC3T3-E1細(xì)胞OPG、RANKL蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探索流體剪切力(FSS)作用下，兩種調(diào)節(jié)骨骼重建的重要分子骨保護(hù)素(OPG)和破骨細(xì)胞分化因子(ODF)即細(xì)胞核因子kB受體活化因子配體(RANKL)的蛋白表達(dá)情況，從而揭示流體剪切力對于維持骨組織形成與吸收動(dòng)態(tài)平衡的特殊作用。
　　 方法：本研究采用體外模型對MC3T3-E1細(xì)胞加載流體剪切力，經(jīng)過不同時(shí)長(0min、30min、60min、90min、120min)加力后，對MC3T3-E1細(xì)胞分別進(jìn)行了染色和裂解，然

2、后運(yùn)用免疫熒光和蛋白印跡法對骨保護(hù)素(OPG)和破骨細(xì)胞分化因子(RANKL)的蛋白表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。
　　 結(jié)果：靜態(tài)培養(yǎng)組RANKL的表達(dá)隨時(shí)間的延長而增加，OPG的表達(dá)則減少，使得OPG與RANKL的比值(OPG/RANKL)不斷下降，促使骨組織向著加速吸收的方向發(fā)展;加載流體剪切力30min后，蛋白檢測發(fā)現(xiàn)FSS促進(jìn)了OPG蛋白表達(dá)且抑制了RANKL蛋白表達(dá)，阻滯了OPG/RANKL比值減少的趨勢；加力60min后，

3、發(fā)現(xiàn)FSS進(jìn)一步促進(jìn)了OPG的表達(dá)，同時(shí)RANKL的表達(dá)則受到較大抑制，與靜態(tài)組相比此時(shí)OPG/RANKL的比值增加了50％左右，使得骨組織向著成骨的方向發(fā)展；在120min內(nèi)，隨著FSS作用時(shí)間的延長OPG/RANKL的比值也在不斷的增加，各組間OPG與RANKL的比值(OPG/RANKL)有顯著的提高。
　　 結(jié)論：成骨細(xì)胞對FSS的響應(yīng)要經(jīng)歷一個(gè)短暫的潛伏期，但與其他作用力相比流體剪切力對成骨細(xì)胞的作用更加有效;流體剪切力