Hsp90小分子抑制劑B3的發(fā)現(xiàn)及與Hsp90相互作用的初步研究.pdf

1、熱休克蛋白90(Heatshockprotein90，Hsp90)是熱休克蛋白家族的重要一員。研究發(fā)現(xiàn)Hsp90的很多客戶蛋白在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程中具有重要的作用，Hsp90因此成為重要的抗腫瘤靶點(diǎn)之一。其抑制劑格爾德霉素(Geldanamycin，GA)的衍生物等二十多種化合物作為抗腫瘤藥物已經(jīng)進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)，并展示出良好的應(yīng)用前景。Hsp90抑制劑已成為抗腫瘤藥物及其先導(dǎo)化合物的重要來源。
　　 本論文以Hsp90為靶點(diǎn)，利

2、用體外相互作用、分子對接和Hsp90的ATPase活性分析等方法，對來自海洋微生物和植物內(nèi)生真菌等306個結(jié)構(gòu)新穎、獨(dú)特的天然化合物進(jìn)行篩選，從中發(fā)現(xiàn)了與GA結(jié)構(gòu)完全不同，但對Hsp90的ATPase活性抑制作用與GA相當(dāng)?shù)男陆Y(jié)構(gòu)類型的抑制劑B3，并初步確立了B3與Hsp90的結(jié)合方式及結(jié)合位點(diǎn)。同時也對其它有潛力的化合物的結(jié)合機(jī)制等進(jìn)行了分析，取得了一些有意義的結(jié)果。
　　 通過體外相互作用分析從306個化合物中篩選到26個與

3、Hsp90有較強(qiáng)相互作用的化合物。在此基礎(chǔ)上，檢測了26個化合物對Hsp90ATPase活性的抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有10個化合物對Hsp90的ATPase活性有較強(qiáng)的抑制作用，其中B3對Hsp90ATPase的IC50僅為0.38μmol/L，接近GA的IC50（0.29μmol/L）。酶動力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，B3是Hsp90的非競爭型抑制劑。
　　 我們通過熒光滴定法和FortebioOctetRed方法研究了B3與Hsp90全長

4、及其截短的N-Hsp90、C-Hsp90間的相互作用，以期確定其結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)果表明B3與全長和N-Hsp90、C-Hsp90間存在著相互作用，但與N-Hsp90的結(jié)合強(qiáng)于C-Hsp90。
　　 結(jié)合分子模擬結(jié)果，通過構(gòu)建Hsp90靠近N端的點(diǎn)突變蛋白質(zhì)，考察B3與Hsp90點(diǎn)突變蛋白質(zhì)間的相互作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Hsp90N-末端的K58，D93和T184三個殘基可能是B3與Hsp90N-末端的結(jié)合位點(diǎn)。
　　 此外，本論文也

5、對具有較強(qiáng)抗腫瘤活性且對Hsp90ATPase活性具有一定抑制作用的結(jié)構(gòu)新穎的化合物DAM的抑制類型及作用機(jī)制進(jìn)行了分析。初步確定了其為Hsp90的非競爭性抑制劑，其抑制Hsp90的IC50約為380μmol/L。
　　 本論文篩選到結(jié)構(gòu)新穎的Hsp90非競爭型抑制劑B3，并且確定了其與Hsp90N-末端的結(jié)合位點(diǎn)。同時本論文還對其它幾個Hsp90抑制劑的抑制類型開展了不同程度的研究。本研究結(jié)果旨在為后續(xù)將其作為抗腫瘤藥物的研究