胞外因子對(duì)bcl-x基因選擇性剪接的調(diào)控及其mRNA前體中Ro318220應(yīng)答元件的分離.pdf

1、選擇性剪接是基因表達(dá)調(diào)控的重要機(jī)制。它不但使人類基因組由少量基因產(chǎn)生大量mRNA和蛋白質(zhì)異構(gòu)體，調(diào)節(jié)mRNA的表達(dá)量，還可控制許多蛋白質(zhì)的結(jié)合能力，胞內(nèi)定位，酶活性，穩(wěn)定性及翻譯后修飾。胞外因子通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)嚴(yán)密地在時(shí)間和空間上對(duì)選擇性剪接進(jìn)行調(diào)控，并最終可能通過(guò)一相應(yīng)pre-mRNA應(yīng)答元件實(shí)現(xiàn)這種調(diào)控。bcl-x是控制凋亡的基因家族bc1-2的成員。經(jīng)選擇性剪接，bc1-x有兩種功能相反的蛋白異構(gòu)體BCL-XL和BCL-XS，前者促進(jìn)

2、細(xì)胞的增殖，后者促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。在不同組織、發(fā)育階段和疾病中，bcl-x表達(dá)受到的調(diào)控不同，造成其產(chǎn)物BCL-XL/BCL-XS樣式不同。在癌癥和腫瘤中，BCL-XL被過(guò)表達(dá)；而B(niǎo)CL-XS卻能夠抑制bcl-2產(chǎn)物誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，提高細(xì)胞對(duì)化療藥品的敏感性。因此，調(diào)控bel-x的選擇性剪接有重要的臨床意義，了解bcl-x的調(diào)控機(jī)理將為治療腫瘤提供更有效更有選擇性的途徑。本論文對(duì)胞外因子通過(guò)其應(yīng)答元件調(diào)控bcl-x的選擇性剪接作了系統(tǒng)詳細(xì)

3、的研究。 首先，通過(guò)檢測(cè)TPA/DMSO，NGF，Ro318220等胞外因子對(duì)大鼠嗜鉻瘤細(xì)胞(pheochromocytoma PC12)bcl-x基因選擇性剪接的影響，發(fā)現(xiàn)胞外因子TPA使BCL-XL的表達(dá)增加；相反Ro318220對(duì)BCL-XL的表達(dá)有下調(diào)作用，同時(shí)上調(diào)BCL-XS的表達(dá)。在人胚胎腎細(xì)胞(Human embryonic kidney cell HEK293T)中，Ro318220也以相似的方式下調(diào)BCL-XL

4、/BCL-XS的表達(dá)。由此我們建立起Ro318220調(diào)控凋亡基因bcl-x選擇性剪接的模型體系。 其次，描述了Ro318220對(duì)BCL-XL/JBCL-XS的下調(diào)作用方式。Ro318220的調(diào)控作用只發(fā)生在無(wú)血清的條件下，但很可能與無(wú)血清培養(yǎng)導(dǎo)致的G0/1期無(wú)依賴關(guān)系。 最后，通過(guò)在HEK293T細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染分析，檢測(cè)了人bcl-x微小基因30個(gè)堿基的系列缺失突變，將對(duì)Ro318220應(yīng)答的前體mRNA順式作用元件縮小