大火草根及其內(nèi)生菌產(chǎn)物化學(xué)成分和生物活性研究.pdf

1、大火草(Anemone tomentosa(Maxim.)Pei)別名野棉花、土白頭翁、大頭翁（陜西），是毛茛科銀蓮花屬多年生草本植物。大火草的藥用部位為根和莖，常用于治療各種瘡癤癰腫、瘧疾、咳嗽、跌打損傷等癥，還對某些昆蟲具有殺傷作用。本論文以藥用植物大火草為實驗材料，主要以大火草的根部粉末和分別從大火草根、莖兩個部位分離出來的內(nèi)生菌為切入點，對大火草根進行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離，再結(jié)合大火草根和莖部位內(nèi)生菌的生物活性，以期為大火草的進一

2、步深入研究及其作為新藥用資源提供堅實的理論基礎(chǔ)。
　　1.用95％乙醇對大火草根粉末進行提取，提取物分散于水，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取。分別對各部位利用硅膠柱層析、大孔吸附樹脂和葡聚糖凝膠Sephadex LH-20等手段進行化學(xué)成分分離，共得到5個單體化合物，采用多種現(xiàn)代波譜分析手段如IR、UV、1H NMR、13C NMR、DEPT等，并結(jié)合化合物的物理、化學(xué)性質(zhì)，鑒定結(jié)果分別為β-谷甾醇(1)、齊墩果酸(2)、

3、23-hydroxy-3-oxo-olean-12-en-28-oic acid(3)、胡蘿卜苷(4)和2α，3α，23-Tri-hydroxy-olean-12-en-28-oic acid O-β-D-glucopyranosylester(5)。且化合物23-hydroxy-3-oxo-olean-12-en-28-oic acid和2α，3α，23-Tri-hydroxy-olean-12-en-28-oic acid O-β-

4、D-glucopyranosyl ester首次從該植物中分離得到。此外，對石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位和系統(tǒng)分離得到的5個單體化合物做抑菌和抗氧化活性研究，結(jié)果顯示，大火草根乙酸乙酯部位有較好的抗氧化活性。
　　2.從大火草根、莖中分離得到23株內(nèi)生菌，其中根10株，莖13株。對分離得到的部分內(nèi)生菌做顯微形態(tài)觀察，結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，將內(nèi)生菌歸屬。并建系統(tǒng)發(fā)育樹，確定各內(nèi)生菌種屬之間的親緣關(guān)系。結(jié)果表明，大火草根-4是鏈球菌

5、屬(Streptococcus);根-3、根-5和根-8是鐮刀菌屬(Fusarium);根-9、根-10、莖-5和莖-12是鏈格孢屬(Alternaria);莖-3屬于Chaetosphaeronema科;莖-4和莖-9是殼針孢屬。大火草內(nèi)生菌主要為鐮刀菌屬、鏈格孢屬和殼針孢屬。
　　3.分別采用濾紙片法，DPPH自由基清除法、羥自由基清除法和總還原力法對大火草內(nèi)生菌發(fā)酵產(chǎn)物做體外抑菌活性、抗氧化活性研究。結(jié)果顯示，大火草內(nèi)生菌發(fā)

6、酵產(chǎn)物對6種指示菌具有較好的抑制作用，尤其是菌株根-1、根-7和根-8發(fā)酵產(chǎn)物的抑菌活性比較顯著。其中根-8的乙酸乙酯部位和正丁醇部位對6種指示菌均有很強的抑制活性，抑菌圈均在20mm以上。此外，從根中分離得到的內(nèi)生菌對6種指示菌都有顯著的抑制作用，尤其是乙酸乙酯部位。從莖中分離得到的內(nèi)生菌，除莖-7和莖-10的乙酸乙酯部位、莖-11的菌絲體提取物表現(xiàn)出中度抑菌活性外，其它抑菌活性均不明顯。此外，對抑菌圈直徑≥20mm的內(nèi)生菌發(fā)酵產(chǎn)物做