Hsa-miR-363、Hsa-miR-423-5p對(duì)HaCaT細(xì)胞表達(dá)VEGF的調(diào)控研究.pdf

1、分類(lèi)號(hào)：R75密級(jí)：學(xué)位類(lèi)別：科學(xué)學(xué)位團(tuán)專(zhuān)業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：10062學(xué)號(hào)：2011602785學(xué)科門(mén)類(lèi)：醫(yī)學(xué)天蚌醬科袁垮T藿AN’|I麓麓纛狂leI蠛封HlVEllSITY碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATIoN論文題目：HsamiR363、HsamiR4235p對(duì)HaCaT細(xì)胞表達(dá)VEGF的調(diào)控研究TITLEAStudyofHsa—miR363、HsamiR4235pRegulatingtheExpressionofVE

2、GFinHaCaTCells一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：皮膚病與性病學(xué)論文作者：任新新指導(dǎo)教師：劉全忠導(dǎo)師組成員：徐麗敏天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中又捅要目的：探討人工構(gòu)建的hsamiR363和hsa—miR4235P兩條microRNAs對(duì)人HaCaT細(xì)胞表達(dá)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的調(diào)控作用，預(yù)測(cè)hsamiR363和hsamiR4235P在銀屑病領(lǐng)域的應(yīng)用前景。方法：培養(yǎng)人永生角質(zhì)形成細(xì)胞(HaC

3、aT細(xì)胞株)，培養(yǎng)完成后進(jìn)行細(xì)胞鋪板，本次實(shí)驗(yàn)設(shè)有hsamiR一363模擬物組、hsamiR一363抑制物組、hsamiR4235p模擬物組、hsamiR4235p抑制物組、模擬物陰性對(duì)照組、抑制物陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組共7組，根據(jù)需要做好復(fù)孔，然后加入轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染，再用MTT法檢測(cè)HaCaT細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞轉(zhuǎn)染的成果，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRTPCR)檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中VEGF基因的mRNA水平，ELlSA法觀察hsamiR363和

4、hsamiR423—5p對(duì)VEGF蛋白表達(dá)水平的調(diào)控效應(yīng)。結(jié)果：MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示hsamiR一363模擬物、hsamiR363抑制物、hsamiR4235p模擬物、hsamiR4235p、抑制物、模擬物陰性對(duì)照和抑制物陰性對(duì)照六組24h、48h、72h的細(xì)胞增殖活性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)，在光學(xué)顯微鏡下觀察到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，代表轉(zhuǎn)染效果良好。隨著時(shí)間的推移細(xì)胞增殖抑制率逐漸升高，到72h時(shí)達(dá)到最高，同樣代表轉(zhuǎn)染率在72h最高。隨著

5、細(xì)胞增殖抑制率達(dá)到最高，轉(zhuǎn)染率也達(dá)到最高，效果最明顯，細(xì)胞也趨于穩(wěn)定，達(dá)到最佳狀態(tài)，促使各組問(wèn)差異體現(xiàn)明顯。qRTPCR結(jié)果顯示hsamiR一363模擬物組、hsamiR一363抑制物組、hsamiR4235p模擬物組和hsamiR4235p抑制物組VEGF基因的mRNA表達(dá)水平值與空白對(duì)照組之間的P值均大于005，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，臣口hsa—miR363模擬物和抑制物、Hsa—miR4235p模擬物和抑制物對(duì)VEGF基因的mRNA表

6、達(dá)水平無(wú)影響。ELISA結(jié)果顯示hsamiR一363模擬物、hsamiR一363抑制物和空白對(duì)照組各組間的VEGF蛋白表達(dá)水平均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即hsa—miR363模擬物組的VEGF蛋白表達(dá)水平較正常組高，hsamiR363抑制物組的表達(dá)水平低，進(jìn)一步說(shuō)明hsamiR363可以使HaCaT細(xì)胞VEGF信號(hào)通路表達(dá)上調(diào)。HsamiR423—5P模擬物、hsamiR423—5P抑制物、模擬物陰性對(duì)照、抑制物陰性對(duì)照和空白對(duì)照組各組間的VEG