BMSCs源性神經(jīng)元與自體神經(jīng)元間形成的研究.pdf

1、[目的]
　　 利用體外模擬細(xì)胞移植共培養(yǎng)體系對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)與大鼠脊髓神經(jīng)元進(jìn)行共培養(yǎng)，觀察BMSCs定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞與宿主神經(jīng)元之間功能性突觸連接的形成，為BMSCs移植治療脊髓損傷的可行性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 [方法]
　　 無(wú)菌條件下取大鼠股骨骨髓，經(jīng)體外分離后用全血培養(yǎng)法培養(yǎng)獲得BMSCs，并進(jìn)行擴(kuò)增、純化、鑒定。取第3代BMSCs用PKH26熒光染料進(jìn)行標(biāo)記，與來(lái)源于新生

2、大鼠脊髓的原代神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，并在神經(jīng)元無(wú)血培養(yǎng)基中加入20 ng/mL表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、20 ng/mL堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)作為誘導(dǎo)劑，在體外建立模擬細(xì)胞移植的共培養(yǎng)體系。經(jīng)過(guò)共培養(yǎng)10天后，通過(guò)檢測(cè)共培養(yǎng)細(xì)胞間的突觸后致密蛋白95(PSD-95)表達(dá)情況，用Fluo-3/AM標(biāo)記共培養(yǎng)細(xì)胞的胞質(zhì)鈣離子，經(jīng)高濃度的KCI刺激后，通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察顯示鈣流熒光強(qiáng)度變化來(lái)反映兩種細(xì)胞間突觸連接鈣離子的

3、活動(dòng)。
　　 [結(jié)果]
　　 用PKH26標(biāo)記的BMSCs與新生大鼠脊髓神經(jīng)元在體外共培養(yǎng)過(guò)程中，在含有EGF、bFGF的無(wú)血清培養(yǎng)基情況下能誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，并能與宿主神經(jīng)元形成突觸樣結(jié)構(gòu)，免疫組織化學(xué)方法結(jié)果顯示PSD-95表達(dá)陽(yáng)性，在激光共聚焦顯微鏡下可以觀察到共培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)高濃度KC1刺激后的胞質(zhì)鈣流熒光強(qiáng)度增加。
　　 [結(jié)論]
　　 在體外模擬細(xì)胞移植共培養(yǎng)體系中，BMSCs源性神經(jīng)元樣