應(yīng)用激光捕獲顯微切割技術(shù)進(jìn)行人和大鼠不同階段生精細(xì)胞差異表達(dá)基因的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、我們利用激光捕獲顯微切割(Laser Capture Microdissection ,LCM)技術(shù),成功地捕獲和分離了人和大鼠的初級(jí)精母細(xì)胞的圓形精子細(xì)胞.在此基礎(chǔ)上從分離的兩種細(xì)胞中提取RNA,合成雙鏈cDNA,并進(jìn)一步通過(guò)抑制性消減雜交(Suppressive Subtractive Hybridization,SSH)方法構(gòu)建了人圓形精子細(xì)胞消減初級(jí)精母細(xì)胞cDNA文庫(kù)、大鼠初級(jí)精母細(xì)胞(RSA)和圓形精子細(xì)胞(RSB)的雙向c

2、DNA消減文庫(kù).基中所構(gòu)建人圓形精子細(xì)胞消減初級(jí)精母細(xì)胞cDNA文庫(kù)的滴度高達(dá)5.6×10<'7>/ml,重組質(zhì)?？寺￡?yáng)性率為88.89,插入片段大小分布主要集中于500bp~750bp.所構(gòu)建文庫(kù)的滴度高達(dá)8.3×10<'9>/ml,重組質(zhì)?？寺￡?yáng)性率為91.67﹪,插入片段大小分布于250bp~1.7kp,主要集中于500bp~1kp.大鼠初級(jí)精母細(xì)胞(RSA)和圓形精子細(xì)胞(RSB)的雙向cDNA消減文庫(kù)的滴度達(dá)8.3×10<'7

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