水稻精細(xì)胞RSSG58基因的表達(dá)研究.pdf

1、以水稻(Oryza sativa L.)精細(xì)胞與二細(xì)胞花粉差減文庫(kù)中得到的在精細(xì)胞中優(yōu)勢(shì)表達(dá)的克隆作為探針,篩選水稻精細(xì)胞cDNA文庫(kù),得到對(duì)應(yīng)的兩個(gè)全長(zhǎng)cDNA克隆.分析表明兩個(gè)全長(zhǎng)cDNA陽(yáng)性克隆長(zhǎng)度分別為2 278bp和2 437bp,共同擁有一個(gè)由579個(gè)氨基酸組成的開(kāi)放讀碼框,分子量為66.7kDa,等電點(diǎn)為4.885.在GenBank中比較顯示與擬南芥的肌球重鏈蛋白有一定的同源性(46﹪),并具有肌球蛋白特征的結(jié)構(gòu)域.用RT

2、-PCR方法進(jìn)行檢測(cè)分析表明此基因在葉、花粉母細(xì)胞期幼穗、單細(xì)胞花粉、二細(xì)胞花粉、成熟花粉、授粉子房和精細(xì)胞中均有表達(dá),但在精細(xì)胞中表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它組織細(xì)胞,證明此基因是在水稻精細(xì)胞中優(yōu)勢(shì)表達(dá)的.為了進(jìn)一步探索RSSG58基因功能,以RSSG58 cDNA為模板,采用RT-PCR和酶切方法得到cDNA片段,反向插入表達(dá)載體pFGC5941中,構(gòu)建了可在植物中調(diào)控表達(dá)反義RNA基因片段的反義重組表達(dá)載體.以根癌農(nóng)桿菌浸漬法侵染擬南芥植株