犬cyclinD1的抗體制備及聯(lián)合p27kip抗體在犬乳腺腫瘤中的應用.pdf

1、CyclinD1是cyclin家族中促細胞周期由G1期到S期的重要因子，被視作生長因子感受器。在G1期表達達到最高，具有周期依賴性，可激活CDK4或CDK6形成復合物，對細胞周期起正向調控作用。它的異常可導致細胞周期的紊亂，促進細胞大量增殖。P27kip是細胞周期素依賴性激酶抑制因子KIP家族的重要成員之一，可抑制多種cyclin/CDK復合物的活性，對細胞周期進行負調控。同時它也發(fā)揮著介導抑制性細胞因子反應，促進分化，增加細胞間粘附的

2、作用。p27kip是多種腫瘤中獨立的預后因子可作為臨床診斷的標志。鑒于這兩種基因的在腫瘤發(fā)生與抑制方面的重要，為了解犬乳腺腫瘤中cyclinD1與p27kip在基因與蛋白的過表達情況及相互關系，進一步了解這兩種蛋白的生物學特性及其在臨床診斷方面上的應用價值，本實驗通過原核表達技術制備犬cyclinD1多克隆抗體，并本實驗室已有p27kip抗體，作其在犬乳腺腫瘤細胞系CHMp、CHMm中及臨床標本中的表達情況進行研究。
　　結果:1

3、、在對兩種細胞系中的兩種基因檢測結果顯示，cyclinD1與p27kip的mRNA的含量在不同的細胞系中情況有差異。CyclinD1在不同細胞系中的mRNA含量間有極顯著性差異(p＜0.01)，且同正常乳腺的差異極顯著(p＜0.01);p27kip在兩種細胞系中的mRNA無顯著性差異，但同正常乳腺中的有極顯著性差異(p＜0.01);cyclinD1與p27kip在相同的細胞系中的mRNA的含量差異是極顯著的(p＜0.01)。2、cycl

4、inD1抗體包涵體表達，在未活化包涵體的情況下成功制備犬cyclinD1抗體，通過檢測該抗體擁有良好的反應原性，抗體效價較高(1∶25600)。3、應用自備抗體檢測兩種細胞系的兩種蛋白表達情況發(fā)現(xiàn)，CyclinD1在不同細胞系中的蛋白表達含量有極顯著性差異(p＜0.01)，且同正常乳腺的差異極顯著(p＜0.01);p27kip在兩種細胞系中的蛋白表達有顯著性差異(p＜0.01)，且同正常乳腺中的有極顯著性差異(p＜0.01);cycli

5、nD1與p27kip在相同的細胞系中的蛋白表達的含量差異是極顯著的(p＜0.01)。4、對臨床收集的84例犬乳腺腫瘤進行病理分類得到有良性腫瘤\導管內癌\浸潤性導管癌\浸潤性小葉癌\黏液癌\髓樣癌伴隨淋巴細胞浸潤\混合樣癌，通過免疫組化法對cyclinD1與p27kip蛋白表達情況結果分析出其陽性表達率。cyclinD1在兩種腫瘤中的表達情況差異不具有統(tǒng)計學意義(p＞0.005)，但良性與惡性腫瘤與正常乳腺組織相比有顯著性差異(p＜0.

6、01)。P27kip在腫瘤與正常組織比較差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。各類型腫瘤間的比較情況顯示，cyclinD1在浸潤性小葉癌與導管內癌腫瘤組織間差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)，p27kip在混合樣癌與導管內癌的差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。cyclinD1與p27kip間存在相關性。
　　結論:盡管cyclinD1與p27kip的檢測通過不同的方法其檢測結果有差異，但均對犬乳腺腫瘤的診斷有指導意義;cyclinD1