bcl-2、cyclinD1、P27kip1在腎癌中表達及相關(guān)性研究.pdf

1、背景及目的：
　　 腎癌又稱腎細胞癌(RCC)，是最常見的成年人腎臟實質(zhì)性惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于膀胱癌，位居泌尿系腫瘤的第二位，且呈逐年上升趨勢。腎癌發(fā)病較隱匿，早期易發(fā)生轉(zhuǎn)移并缺乏典型的臨床癥狀，出現(xiàn)較為明顯的癥狀時絕大多數(shù)病人已經(jīng)進入中晚期。目前腎癌的診斷仍依據(jù)影像學(xué)及醫(yī)生的臨床分析，這很難早期作出精確的診斷，不能為早期治療贏得充分的時間。鑒此，國內(nèi)外學(xué)者紛紛開始探索通過分子生物學(xué)手段早期診斷腎癌。
　　 凋亡抑制

2、基因bcl-2編碼的產(chǎn)物位于細胞膜型結(jié)構(gòu)，特別是線粒體膜上，bcl-2可通過阻斷Ca2+從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的釋放、抑制caspase的活化和IP3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等多種途徑來抑制細胞凋亡。在正常細胞周期中，cyclinD1與細胞周期依賴激酶4(cyclin dependent kinase，CDK4)形成復(fù)合物啟動DNA的合成，加速細胞從G1期向S期分化，完成細胞增殖；cyclinD1與bcl-2均為細胞分裂增殖的正性調(diào)節(jié)因子。P27kipl是細胞周

3、期依賴性激酶抑制物，通過抑制cyclinD1-CDK4和cyclinE-CDK2等激酶復(fù)合物的活性來抑制細胞周期，在細胞周期中發(fā)揮著負性調(diào)節(jié)的作用。在胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等多種腫瘤中，免疫組化結(jié)果顯示cyclinD1、bcl-2均呈高表達，而p27kipl呈低表達。目前國內(nèi)用半定量分析方法檢測bcl-2、cyclinD1、p27kipl在腎癌中表達的研究甚少，bcl-2、cyclinD1、p27kipl三者之間相關(guān)性的研究國內(nèi)尚未見報道

4、。
　　 本實驗旨在探索bcl-2、cyclinD1、p27kipl在腎癌中表達情況，分析bcl-2、cyclinD1、p27kipl在腎癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮的作用及機制，闡述上述三個因子在腎癌的臨床診斷、預(yù)后判斷及指導(dǎo)治療中的價值，并分析bcl-2、cyclinD1、p27kipl在腎癌發(fā)生、發(fā)展中過程中的相關(guān)性。
　　 材料與方法
　　 1.選擇2008年12月至2009年6月鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院、河南省腫瘤醫(yī)

5、院、河南省人民醫(yī)院住院的RCC患者42例，其中男27例，女15例，年齡30-82歲，平均年齡57歲。所有病例均經(jīng)病理證實，其中透明細胞癌33例，非透明細胞癌9例；臨床病理分期Ⅰ期10例，Ⅱ期13例，Ⅲ期12例，Ⅳ期7例，其中Ⅳ期標本為介入治療及免疫治療后腔靜脈癌栓消失、腫瘤體積縮小，患者強烈要求手術(shù)的腎癌標本。10例正常腎組織作為對照組，取自同期腎外傷、重復(fù)腎、輸尿管中下段癌，術(shù)后病理均證實為正常腎組織。組織標本：術(shù)中切取約500mg新

6、鮮組織后立即置入無RNA酶凍存管中接受RNAse-Blocker液浸泡，24 h后棄去液體轉(zhuǎn)入-80℃冰箱凍存。
　　 2.應(yīng)用RT-PCR的方法檢測bcl-2、cyclinD1與p27kipl mRNA在腎癌組織中的表達，分析bcl-2、cyclinD1、p27kipl之間的關(guān)系。
　　 3.所有數(shù)據(jù)錄入SPSS11.0軟件包進行統(tǒng)計分析，取雙側(cè)檢驗水準α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1.42例腎癌

7、標本中bcl-2 mRNA表達的中位值(0.56)顯著高于正常腎組織的中位值(0.13)(P<0.05)；腎癌中cyclinD1 mRNA表達的中位值(0.65)，顯著高于正常腎組織(0.15)(P<0.05)；p27kiplmRNA在腎癌中表達的中位值(0.46)，顯著低于正常組織(0.86)(P<0.05)。在腎癌臨床分期中bcl-2在Ⅰ+Ⅱ期高于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.05)，cyclinD1在Ⅰ+Ⅱ期低于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.05)，p2

8、7kipl mRNA表達量隨著臨床分期的升高而降低(P<0.05)；bcl-2mRNA在腎透明細胞癌、非透明細胞癌(乳頭狀細胞癌+嫌色細胞癌)中的表達量分別為：0.58±0.19、0.39±0.18，t=2.74，(P<0.05)。CyclinD1mRNA在腎透明細胞癌、非透明細胞癌中的表達量分別為：0.66±0.08、0.55±0.08，t=3.50，(P<0.05)。p27kipl mRNA在腎透明細胞癌、非透明細胞癌中的表達量分別

9、為：0.49±0.2、0.45±0.16，t=0.50，(P>0.05)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2.偏相關(guān)分析示p27kipl與cyclinD1之間相關(guān)系數(shù)為-0.57，(P<0.05)，呈負相關(guān)性；p27kipl與bcl-2之間相關(guān)系數(shù)為0.44，(P<0.05)呈正相關(guān)性，而cyclinD1與bcl-2之間相關(guān)系數(shù)為-0.06，(P<0.05)，兩者之間無相關(guān)性。
　　 結(jié)論：
　　 1.bcl-2、cy