銀杏葉鼻用原位凝膠劑的研究.pdf

1、銀杏葉提取物（Ginkgo Biloba extract，GBE）是以中藥銀杏葉為原料提取的有效成分。主要成分為總黃酮苷，萜類內(nèi)酯。其中槲皮素、山柰素、異鼠李素是黃酮苷的三種主要苷元，對(duì)心腦血管疾病，高血脂，高血壓，清除氧自由基具有顯著的療效；萜類內(nèi)酯包括銀杏內(nèi)酯 A、B、C、M、J、和白果內(nèi)酯，為強(qiáng)效血小板活化因子（PAF）拮抗劑，能降低血黏度，改善血液流動(dòng)性[1,2]。近來(lái)研究表明，GBE可改善認(rèn)知功能減退及治療老年性癡呆。

2、　　老年癡呆（senile dementia，SD）[3]是指老年期出現(xiàn)的已獲得的智能在本質(zhì)上出現(xiàn)持續(xù)的損害，也就是由器質(zhì)性腦損害導(dǎo)致的基本上不可逆的智能缺失和社會(huì)適應(yīng)能力降低。其發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，可能與膽堿能、單胺能、神經(jīng)肽能等多種遞質(zhì)和調(diào)制物的功能障礙有關(guān)。
　　GBE目前臨床上給藥途徑為靜脈和口服制劑?？诜o藥雖然方便，但存在嚴(yán)重的首過(guò)效應(yīng)，生物利用度低。皮下注射疼痛且不宜自主用藥。因此，研制一種有效，便捷的給藥途徑是提高腦

3、內(nèi)濃度、增強(qiáng)治療作用的一個(gè)選擇。
　　鼻腔給藥是近年來(lái)研究最多的給藥途徑之一，不僅具有藥物吸收迅速，無(wú)首過(guò)效應(yīng)，給藥方便等優(yōu)點(diǎn)，而且還具有向腦內(nèi)遞藥的特性，因而有望提高 GBE的腦內(nèi)濃度，增強(qiáng)對(duì)老年癡呆的防治效果。中藥鼻腔給藥的現(xiàn)代劑型以滴鼻劑為主，但由于鼻腔粘液分泌及纖毛運(yùn)動(dòng)，使藥物在鼻腔中滯留時(shí)間短，生物利用度降低。因此，本課題擬將 GBE制成鼻腔原位凝膠劑，考察離體黏膜吸收作用以及評(píng)價(jià)其給藥后的體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，為 GBE

4、臨床應(yīng)用提供有效便捷的新制劑。
　　主要研究?jī)?nèi)容：
　　1、GBE體外分析方法的建立
　　建立HPLC-UV法測(cè)定GBE中TFG的含量。Agilent C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇：0.4％磷酸溶液（50：50，v/v）；流速：0.8 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。
　　建立HPLC-ELSD法測(cè)定GBE中萜內(nèi)酯含量。依利特C18色譜柱，流動(dòng)相：甲醇：四氫呋喃：水（25：

5、10：65，v/v）；流速：0.6 mL·min-1；載氣(N2)流速：2.7 L·min-1；柱溫：35℃；漂移管溫度：115℃。
　　2、銀杏葉鼻用原位凝膠劑的處方篩選
　　分別以粘度粘附力為指標(biāo)，carbopol934、HPMC為載體制備原位凝膠，結(jié)果以0.8%carbopol934和1.5%HPMC為最佳。銀杏葉提取物在水中屬于極微溶解。本研究采用相溶解度法，考察GBE在不同體積分?jǐn)?shù)的HP-β-CD下相溶解度。其余輔

6、料以鼻纖毛毒性小，不影響藥物穩(wěn)定性為原則確定處方。
　　3、銀杏葉鼻用原位凝膠劑的制備工藝研究
　　室溫下取銀杏葉提取物4.5 g，加入已用重蒸餾水溶解的HP-β-CD溶液，不斷攪拌溶解，加入處方劑量的其他組分，攪拌使溶解，加入HPMC1.5 g，使之水化溶脹，再將卡波姆9340.8 g溶解其中攪拌約24 h，使之充分溶脹。用1 mol·L-1 NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至4.3。
　　4、促吸收劑對(duì)GBE-ISG吸收的影響

7、
　　采用離體羊鼻黏膜，使用 Franz擴(kuò)散池，選擇1%吐溫-80、0.5%冰片、1%氮酮，而后分別進(jìn)行鼻黏膜吸收試驗(yàn)。結(jié)果，3種促滲劑黏膜滲透速率為：1%氮酮＞1%吐溫＞0.5%冰片。隨氮酮濃度的增大，藥物黏膜吸收逐漸增加，吸收過(guò)程符合Weibull動(dòng)力學(xué)方程。
　　5、銀杏葉鼻用原位凝膠劑的安全性評(píng)價(jià)
　　采用在體蟾蜍上顎模型考察銀杏葉鼻用凝膠劑及輔料對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)的影響，從而評(píng)價(jià)制劑的鼻黏膜毒性。結(jié)果表明，銀杏葉鼻用

8、凝膠劑和輔料均無(wú)不良影響。
　　6、銀杏葉鼻用原位凝膠劑的初步穩(wěn)定性考察
　　制備3批GBE-ISG制劑，進(jìn)行初步穩(wěn)定性試驗(yàn)（耐熱試驗(yàn)、光照試驗(yàn)、高濕度試驗(yàn)），初步確定本品可在室溫下保存。
　　7、銀杏葉原位凝膠在兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　建立了HPLC法測(cè)定槲皮素血藥濃度。采用Agilent C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸溶液（60：40，v/v）；檢測(cè)波長(zhǎng)為3

9、68 nm；進(jìn)樣量為20μL。經(jīng)方法學(xué)評(píng)價(jià)，提取回收率、方法回收率和精密度均符合生物樣品測(cè)定要求。測(cè)定了6只家兔口服銀杏葉片和鼻腔給藥GBE-ISG后血漿中槲皮素的濃度，計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果，銀杏葉鼻用原位凝膠劑和片劑的體內(nèi)過(guò)程均符合單室模型，銀杏葉鼻用原位凝膠劑的Tmax約為1.22 h，Cmax約為779.30μg·L-1；而對(duì)照組銀杏葉片劑的Tmax約為1.92 h，Cmax約為452.79μg·L-1，其相對(duì)生物利用度為77