膜聯(lián)蛋白A2在肝肺綜合癥大鼠血清致肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、 背景與目的：肝肺綜合癥(hepatopulmonary syndrome,HPS)是慢性肝病導(dǎo)致肺微血管病變引起動脈血氧合障礙的一種綜合病征。肺血管重塑是肺微血管病變的主要病理變化,尋找調(diào)控HPS肺血管重塑的靶蛋白是目前研究的重點(diǎn)。膜聯(lián)蛋白A2(annexin A2, ANXA2)是鈣依賴的磷脂結(jié)合蛋白超家族成員,參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的分化、增殖、遷移和凋亡,在多個(gè)生命過程中發(fā)揮重要作用。本研究擬探討 ANXA2 在 HPS 大鼠血清致

2、肺動脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖中的作用,為闡明HPS肺血管重塑的分子機(jī)制及其防治提供依據(jù)。方法：原代培養(yǎng)大鼠PASMCs并鑒定后,隨機(jī)分為2組：對照組(C組)和HPS組,分別用正常大鼠血清培養(yǎng)C組PASMCs,HPS大鼠血清培養(yǎng)HPS組PASMCs,兩組PASMCs于血清中孵育24、48、72 h。采用氚-胸腺嘧啶核苷摻入法(3H-TdR)、噻唑藍(lán)比色法

3、(MTT)檢測大鼠PASMCs增殖變化,分別用RT-PCR和western blot檢測大鼠PASMCs中ANXA2 mRNA及其蛋白表達(dá)含量變化；運(yùn)用RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù)將ANXA2基因沉默,觀察對HPS大鼠血清致PASMCs增殖的影響,并用western blot檢測ERK1/2、NF-κB磷酸化水平。結(jié)果：HPS組PASMCs在血清孵育24、48、72 h的3H-TdR以及 MTT 檢測值明

4、顯高于 C 組各時(shí)間點(diǎn),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且隨大鼠血清作用時(shí)間延長,HPS組PASMCs 3H-TdR以及MTT檢測值增加更為明顯；兩組均檢測出ANXA2 mRNA及其蛋白的表達(dá),但與C組比較,HPS組PASMCs內(nèi)ANXA2 mRNA及其蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05),且隨時(shí)間延長,表達(dá)量增加更明顯。siRNA下調(diào)ANXA2表達(dá)后,再經(jīng)HPS大鼠血清孵育,PASMCs MTT以及 3H-TdR摻入量明顯低于對照組(