DZNep聯(lián)合5-雜氮-2’-脫氧胞苷酸對MST1基因表達的影響及其對急性早幼粒細胞白血病NB4細胞株增殖、凋亡、分化的影響.pdf

1、目的：檢測白血病患者和惡性血液病細胞株中MST1的表達水平及探討其臨床意義，篩選出MST1低表達的惡性血液病細胞株作為實驗對象；采用甲基化特異性PCR（methylation specific PCR，MSP）檢測急性早幼粒細胞白血病NB4細胞株MST1基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)；探討3-Deazaneplanocin A（DZNep）及5-雜氮-2’-脫氧胞苷酸（5-aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-2'-CdR）對

2、MST1基因表達的影響，同時檢測其對NB4細胞株增值、凋亡、分化的影響。
　　方法：應用Real-time PCR和Western-blotting檢測臨床標本和5種惡性血液病細胞株中MST1的表達狀態(tài)及分析其臨床意義并篩選出低表達的NB4細胞株；采用MSP檢測NB4細胞株MST1基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)；予DZNep及5-Aza-2'-CdR作用于NB4細胞后，采用CCK-8法觀察細胞的增殖情況； Hoechst33258熒光染

3、色法觀察細胞凋亡情況，Annexin V FITC/PI流式細胞儀檢測凋亡率；real-time PCR檢測MST1、Bcl-2、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的表達情況；Western-blotting鑒定MST1、procaspase-3、procaspase-9蛋白的表達變化。
　　結果：（1）MST1在急性白血病初治患者較正常人表達明顯減低（P<0.05）,但隨著疾病治療的好轉(zhuǎn)，完全緩解患者與正常人比較差異無統(tǒng)計學

4、意義（P＞0.05），對于復發(fā)/難治性的急性白血病患者，該基因的表達較正常人明顯減低（P<0.05），同時，與初治急性白血病患者比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；MST1基因在急性早幼粒細胞白血病NB4細胞株中低表達。（2）在NB4細胞中MST1基因啟動子區(qū)存在完全甲基化；（3）CCK-8方法檢測結果顯示，DZNep及5-Aza-2'-CdR能抑制NB4細胞增殖并呈藥物濃度依賴性；其也能抑制細胞G1-S轉(zhuǎn)換（P<0.05）且聯(lián)合用藥

5、抑制作用更強（P<0.05）；Hoechst33258熒光染色可見DZNep及5-Aza-2'-CdR作用均可使細胞核致密濃染，細胞凋亡增加，聯(lián)合作用凋亡率增加更明顯；流式細胞儀檢測單藥作用細胞凋亡率增加（P<0.05），聯(lián)合用藥凋亡率增加更明顯（P<0.05）；DZNep及5-Aza-2'-CdR還可能減少Bcl-2的表達，促進procaspase-3、procaspase-9的活化，從而促進細胞凋亡。（4）DZNep可能通過下調(diào)DN

6、MT3B的表達水平及相關組蛋白甲基化的修飾使MST1表達上調(diào)；5-Aza-2'-CdR主要通過下調(diào)DNMT3A的表達使MST1的表達上調(diào)；兩藥聯(lián)合使MST1的表達上調(diào)更為明顯。
　　結論：（1）MST1基因具有抑癌基因功能在急性白血病患者中低表達，且隨著治療的進程，其表達水平發(fā)生著動態(tài)變化。（2）在NB4細胞株中MST1基因的啟動子區(qū)存在著CpG島的完全甲基化。（3）DZNep及5-Aza-2'-CdR可使細胞阻滯于G1/S期而使