安迪粉針劑的制備工藝及其抗白血病作用研究.pdf

1、白血病是起源于造血或淋巴干細(xì)胞的惡性疾病，由于干細(xì)胞的受損致使克隆中的白血病細(xì)胞停滯于細(xì)胞發(fā)育的不同階段，是造血系統(tǒng)常見的一種惡性腫瘤，歸屬于中醫(yī)“急勞”“溫毒”“血證”“痰毒腫核”等范疇。白血病屬頑疾之類，古代醫(yī)家認(rèn)為對頑病痼疾當(dāng)“以毒攻毒”（《醫(yī)學(xué)問答》）。蟾酥為有毒中藥，以蟾酥治病符合“以毒攻毒”原則。本課題選擇蟾酥單味藥，按照中醫(yī)理論和現(xiàn)代醫(yī)藥研究手段，研究安迪粉針劑的制備工藝及其體外藥效學(xué)，旨在研發(fā)服用方便、療效確切的治療新藥

2、。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選安迪粉針劑提取工藝和制備工藝，以蟾酥中的酯蟾毒配基和華蟾酥毒基以及出膏率作為參考指標(biāo)；采用不同的方法確立制備工藝；研究安迪粉針劑對人慢性髓性白血病K562細(xì)胞株增殖和凋亡的影響，以及探討其作用機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法 1、優(yōu)選蟾酥的提取工藝 以酯蟾毒配基和華蟾酥毒基的含量和出膏率為指標(biāo)，分別考察其與料液比、提取時間、提取次數(shù)的關(guān)系，優(yōu)選正交工藝。 2、考察安迪粉針劑

3、的制備工藝 研究通過藥物的溶解情況篩選出增溶劑，結(jié)合制劑的色澤、外觀和澄明度，選出支持劑。 3、安迪粉針劑對白血病細(xì)胞K562的影響觀察 安迪粉針劑對人白血病細(xì)胞K562 增殖、凋亡、細(xì)胞形態(tài)的影響。 采用臺盼蘭染色對細(xì)胞增殖的影響，MTT 法檢測安迪粉針劑對細(xì)胞活力的影響；流式細(xì)胞儀分析安迪粉針劑對細(xì)胞周期和凋亡的影響；熒光顯微鏡和電鏡下觀察安迪粉針劑對細(xì)胞形態(tài)的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、蟾

4、酥的提取工藝 最佳工藝條件為A1B3C1，即乙醇體積分?jǐn)?shù)70％，提取時間60min，溶劑量1∶20。精確稱量蟾酥3份，每份1g按照最佳方案A1B3C1進(jìn)行回流提取，綜合評分平均值為97.8％。 2、安迪粉針劑的制備工藝 試驗(yàn)結(jié)果表明丙二醇做增溶劑，當(dāng)每100mL提取液中加入20mL丙二醇溶液（即體積分?jǐn)?shù)約為20％）時，即可使蟾酥提取物溶解。甘露醇作為支持劑，用量為200mg/支（即質(zhì)量濃度為100g·L-1）。

5、 3、安迪粉針劑對白血病細(xì)胞K562的影響 MTT法測得安迪粉針劑在(2.5～20.0)μg/mL濃度范圍內(nèi)能明顯抑制K562細(xì)胞的增殖，并具有濃度依賴性，20.0μg/mL安迪粉針劑作用36 h的K562細(xì)胞株A值最低；流式細(xì)胞技術(shù)顯示10.0μg/mL，20.0μg/mL安迪粉針劑處理組K562細(xì)胞的凋亡率分別為50.0％和39.0％，明顯高于對照組的10.0％（P﹤0.05）；電鏡下可見K562細(xì)胞呈典型凋亡樣改變。

6、 結(jié)論 1、蟾酥的提取工藝提取時間和溶劑量是影響蟾酥中脂溶性成分提取工藝的主要因素，采用用70％乙醇,料液比為1∶20 提取60min 得出提取效果最好。 2、安迪粉針劑的制備工藝試驗(yàn)證明安迪粉針劑的制備工藝可行，通過藥物的溶解情況篩選出增溶劑丙二醇，結(jié)合制劑的色澤、外觀和澄明度，確定支持劑甘露醇。 3、安迪粉針劑對白血病細(xì)胞K562 的影響安迪粉針劑能明顯抑制K562細(xì)胞增殖，并具有顯著促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作