電針對腦出血模型大鼠腦內補體C3、C4介導炎癥反應的影響機制研究.pdf

1、目的： 腦出血(intra cerebral hemorrhage，ICH)是臨床上常見的腦血管疾病，發(fā)病率，病死率和致殘率較高，嚴重威脅人類健康。近年來越來越多的證據表明，免疫因素及炎癥反應在腦出血的病理生理中起重要作用，而補體系統(tǒng)激活是腦出血損傷病理機制中重要的因素之一。本實驗在目前針灸治療中風病研究的基礎上，結合中，西醫(yī)關于中風發(fā)病機制的新認識，研究補體C3、C4介導的炎癥反應在腦出血后補體級聯(lián)反應中的重要作用以及電針水溝

2、、內關、足三里穴對腦出血模型大鼠補體介導的炎癥反應的影響及作用機理。 方法： 選擇健康Wistar大鼠60只(平均體重200-250g)，雌雄各半。將大鼠編號，查隨機數(shù)字表，分為4組：正常組、生理鹽水組、模型組和電針治療組。根據出血時間，正常組、假手術組分別分為3h、24h、72h組，每組2只。模型組、電針治療組分別分為3h、24h、72h組，每組8只。模型組采用0.4ul膠原酶VII注射大鼠尾殼核(前囟向后0.2mm，

3、右旁開2.9mm，深6mm)誘導大鼠腦出血的方法。模型組分別于造模后3h、24h、72h時取材。 電針組采用電針治療腦出血模型大鼠，穴取水溝穴、內關穴(雙側)、足三里穴(雙側)。電針3h、24h、72h組分別于造模后即刻針刺一次，然后每過12小時針刺1次，電針3h組共針刺1次，電針24h組共針刺3次，電針72h組共針刺7次。水溝和右側大鼠耳朵接一對電極，同側內關和足三里接一對電極，連續(xù)波，頻率120次/min，強度1mA，每次留

4、針30min。然后分另4于造模后3h、24h、72h時取材。 以上四組大鼠均用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，開胸經升主動脈依次灌入生理鹽水100ml、4℃預冷的合4％多聚甲醛的0.01 mol/L磷酸緩沖液(PBS．pH7.4) 400ml。灌畢取腦，置于4％多聚甲醛溶液過夜后固定。以注射點為中心冠狀石蠟切片，片厚5μm，切10片。采用免疫組化法測量大鼠腦組織中補體C3、C4，在400倍高倍鏡下隨機取血腫中周圍4個不重疊視野．計數(shù)

5、補體C3和補體C4陽性細胞數(shù)．統(tǒng)計分析。觀察神經缺缺損行為體征并連暫評分。 結果： 1.模型組和電針組在神經行為學評分的比較 3h電針組神經行為學評分較3h模型組降低，但無顯著性差異(P>0.05)；24h電針組較24h模型組明顯降低(P<0.05)，有顯著性差異；72h電針組較72h模型組明顯降低(P<0.05)，有顯著性差異。 2.各組腦組織補體C3的表達3h 模型組補體C3表達較假手術組無明顯變化(P>0.

6、05)，無顯著性差異；24h模型組較假手術組明顯升高(P<0.05)，有顯著性差異；72h模型組較假手術組明顯升高(P<0.01)，有非常顯著性差異；3h電針組補體C3表達較3h模型組降低(P>0.05)，無顯著性差異；24h電針組較24h模型組降低(P<0.05)，有顯著性差異；72h電針組較72h模型組明顯降低(P<0.01)，有非常顯著性差異。 3.各組腦組織補體C4的表達 3h模型組補體C4表達較假手術組無明顯變化(P>

7、0.05)，無顯著性差異；24h模型組較假手術組明顯升高(P<0.05)，有顯著性差異；72h模型組較假手術組明顯升高(P<0.01)，有非常顯著性差異；3h電針組補體C4表達較3h模型組降低，無顯著性差異(P>0.05)；24h電針組較24h模型組降低(P<0.05)，有顯著性差異；72h電針組較72h模型組明顯降低(P<0.01)，有非常顯著性差異。 4.腦出血后3h、24h、72h血腫周圍腦組織補體C3、C4表達相關性分析

8、腦出血后24h、72h血腫周圍腦組織補體C3、C4表達呈正相關關系，而腦出血后3h補體C3、C4表達呈負相關關系。 結論： 1.補體系統(tǒng)激活參與了腦出血后炎癥反應，可能是腦出血損傷的一個重要因素之一。 2.補體成分C3、C4在腦出血模型大鼠腦組織中的變化具有動態(tài)一致性。 3.電針水溝、內關、足三里能改善腦出血大鼠的神經缺損行為體征。 4.24h電針組、72h電針組的治療效果比 3h 電針組的治療效