利用微生物代謝酶轉(zhuǎn)化大豆異黃酮的研究.pdf

1、本文從擬青霉、LWG-0506及LWQ-0508三種菌中篩選了產(chǎn)胞外β-葡萄糖苷酶活力較高的菌株LWQ-0508。并對(duì)其培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明最佳培養(yǎng)基組成為：黑豆與麩皮比例為2：3，加水量與固體物料比控制在1．5：1，(NH<,4><,2>SO<,4>0.5％，KH<,2>PO<,4>0.1％，MgSO<,4>0.1％，水揚(yáng)苷0.01％。最優(yōu)產(chǎn)酶條件為：種子培養(yǎng)到42h后接種，發(fā)酵培養(yǎng)溫度32℃，發(fā)酵初始pH為6.0，接

2、種量10％，發(fā)酵培養(yǎng)84h。通過優(yōu)化使酶活力由原來的947.66u·m L<'-1>提高到1751.12u·m L<'-1>，酶活力提高了84.7％。 對(duì)酶液提取條件進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明最佳浸提條件為：以蒸餾水為浸提劑，料液比為1：2，60℃浸提4h。對(duì)粗酶液進(jìn)行分離、純化，并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果表明β-葡萄糖苷酶的最適作用pH為4.5左右，酶的最適作用溫度為55℃左右：70℃保溫1h后酶活力損失顯著增大；置于pH3.5～7

3、.0的緩沖溶液中的酶液剩余酶活力達(dá)50％以上，低予或高于此范圍酶活力迅速下降；其中Ca<'2+>、Zn<'2+>、Mn<'2+>對(duì)酶活力具有不同程度的激活作用，Cu<'2+>、Hg<'2+>、Ag<'+>對(duì)酶具有抑制作用；通過Hanes-Woolf作圖可求得β-葡萄糖苷酶的米氏常數(shù)Km值為0.554mg·m L<'-1>該試驗(yàn)菌所產(chǎn)粗酶液經(jīng)75％乙醇沉淀，DEAE-Sephadex A-50層析后，經(jīng)SDS-PAGE電泳計(jì)算其分子量為4

4、9KD。 在上述研究的基礎(chǔ)上，對(duì)該β-葡萄糖苷酶粗酶液應(yīng)用于大豆異黃酮糖苷的轉(zhuǎn)化進(jìn)行了初步研究，該試驗(yàn)結(jié)果表明LWQ-0508菌株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶粗酶液對(duì)大豆異黃酮糖苷轉(zhuǎn)化的最佳條件為：酶解溫度為60℃，酶解pH6.0，底物：酶為1mg：30u·g<'-1>，酶解時(shí)間6h。 在最佳酶解條件下，以10％大豆異黃酮粉為水解底物，經(jīng)粗酶液酶解后，大部分異黃酮粉存在于沉淀中,其固形物回收率在84.4％左右，轉(zhuǎn)化后沉淀中的大豆異黃