碎米薺硒多糖的提取、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性研究.pdf

1、碎米薺是全國(guó)普遍分布的野生植物，屬于十字花科，又名菜子七、半邊菜，為民間常用藥物，然而對(duì)碎米薺的生理和基本的生化組成進(jìn)行分析及其活性成分進(jìn)行研究利用的還未見(jiàn)報(bào)道。將多糖與硒有機(jī)結(jié)合成的硒多糖不但把無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化成了有機(jī)硒，其化學(xué)結(jié)構(gòu)形成了特殊的硒氧鍵，也有別于普通多糖，不僅可以使癌細(xì)胞DNA合成受阻而抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，而且可以通過(guò)提高相關(guān)酶的活性來(lái)拮抗重金屬中毒和抗氧化活性的能力，其生物活性普遍高于多糖和硒，更易于為機(jī)體的吸收和利用，近兩年

2、有研究報(bào)道從人工富集硒的靈芝、螺旋藻、海藻等植物中提取的硒多糖有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，但對(duì)天然植物中提取的硒多糖的功能研究目前未見(jiàn)報(bào)道。本文以湖北恩施富硒地帶碎米薺為研究對(duì)象，利用生物大分子研究的最新技術(shù)和現(xiàn)代分離手段，對(duì)碎米薺硒多糖進(jìn)行分離純化，并進(jìn)一步對(duì)其結(jié)構(gòu)特征及生物活性進(jìn)行研究，主要結(jié)果如下： 1.樣品的確定及碎米薺根的生化組成研究 以湖北恩施地區(qū)多年生碎米薺為研究對(duì)象，對(duì)其根、莖、葉進(jìn)行硒含量分析的基礎(chǔ)上，選定碎

3、米薺根作為實(shí)驗(yàn)樣品。并對(duì)根的生化組成作了比較系統(tǒng)的分析，測(cè)定了水分、灰分、蛋白質(zhì)、脂肪、類(lèi)胡蘿卜素、葉綠素和礦物元素的含量。 2.碎米薺硒多糖的提取、分離純化和純度鑒定 以碎米薺根為原料，采用水提、醇沉法制備出碎米薺硒多糖，并確定了適合硒多糖提取的最佳工藝，即浸提溫度為75℃，浸提系數(shù)2次，浸提時(shí)間為2h，料液比為1：40，硒多糖的提取率43.35％，硒多糖中硒含量為1.965mg／kg。利用DEAE-Cellulose

4、-52離子交換層析，采用步進(jìn)式洗脫模式成功的將碎米薺硒多糖進(jìn)行SepHdexG-200葡聚糖凝膠柱層析，得到四種均一的硒多糖，SDS-PAGE電泳法鑒定其純度。 3.碎米薺硒多糖的結(jié)構(gòu)鑒定 采用紫外分光光度計(jì)、傅立葉紅外、氣相、氨基酸分析儀等方法測(cè)定了碎米薺硒多糖的分子結(jié)構(gòu)、單糖組成和氨基酸組成分析。 4.碎米薺硒多糖的抗氧化活性研究 用K<,3>［Fe（CN）<,6>］和脫氧核糖－鐵體系，測(cè)定碎米薺硒多

5、糖的還原力，對(duì)羥自由基（-OH）的抑制作用和對(duì)超氧陰離子的清除作用；用丙二醛（MDA）試劑盒測(cè)定小鼠肝勻漿和肝線粒體中MDA含量，分光光度法測(cè)定小鼠肝線粒體腫脹度；用GSH－PX試劑盒測(cè)定小鼠全血及肝勻漿中GSH－PX活力，結(jié)果顯示碎米薺硒多糖具有明顯的抑制.OH和超氧陰離子的作用，其對(duì)兩種自由基的半抑制濃度（SC<,50>）分別為10.94mg/ml和7.65mg/ml；在體外，10mg·ml<’-1>碎米薺硒多糖對(duì)肝勻漿MDA生成抑

6、制率分別為33.12％（非誘導(dǎo)組）、23.82％（Fe2<’+>誘導(dǎo)組）、37.94％（H<,2>O<,2>誘導(dǎo)），對(duì)肝線粒體MDA生成抑制率達(dá)41.53％，使自由基誘導(dǎo)的小鼠肝線粒體腫脹度低于非誘導(dǎo)組；在體內(nèi)，碎米薺硒多糖小鼠的肝勻漿MDA生成率明顯低于對(duì)照生理鹽水組，全血和肝勻漿中GSH.PX活力明顯高于對(duì)照組。5碎米薺硒多糖的免疫活性研究 5.啐米薺硒多糖的免疫活性研究 分別以生理鹽水對(duì)照組、無(wú)機(jī)硒、CUS.P組、

7、硒+CUS－P組、CUS-SeP低劑量組、CUS-SeP中劑量組、CUS-SeP高劑量組設(shè)置試驗(yàn)組；測(cè)定肝臟、脾臟重量并計(jì)算臟器系數(shù)；碳粒廓清法測(cè)定巨噬細(xì)胞吞噬功能：MTF法測(cè)定脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能；二硝基氟苯法測(cè)定遲發(fā)型超敏反應(yīng)；比色法測(cè)定脾細(xì)胞抗體的生成和血清溶血素含量；ELISA法測(cè)定免疫球蛋白中IgG含量。碎米薺硒多糖對(duì)小鼠的非特異性免疫、細(xì)胞免疫和體液免疫都有著顯著的影響，并且優(yōu)于同劑量的無(wú)機(jī)硒、碎米薺多糖及無(wú)機(jī)硒+碎米薺多糖組