噬肺軍團菌編碼的泛素連接酶的生物化學(xué)性質(zhì)及生物學(xué)功能研究.pdf

1、噬肺軍團菌(Legionella pneumophila)在感染宿豐細(xì)胞過程中，能夠干擾宿主細(xì)胞的膜泡運輸體系，募集包括源于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的光滑膜泡、線粒體和核糖體等細(xì)胞器，并逃避吞噬泡的成熟過程，避免與溶酶體的融合降解，隨后在經(jīng)過修飾的吞噬泡內(nèi)復(fù)制增殖并裂解宿主細(xì)胞，進而導(dǎo)致疾病的產(chǎn)生。噬肺軍團菌的Dot/Icm四型分泌系統(tǒng)對于其對宿豐細(xì)胞內(nèi)的感染非常重要，該四型分泌系統(tǒng)突變的噬肺軍團菌進入宿主細(xì)胞后所形成的吞噬泡很快經(jīng)內(nèi)體成熟途徑與溶酶體融

2、合而被降解。Dot/Icm系統(tǒng)可以分泌許多細(xì)菌效應(yīng)蛋白進入宿主細(xì)胞內(nèi)，但是目前對這些效應(yīng)蛋白還知之甚少。 本課題通過對噬肺軍團菌基因組數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)分析，我們發(fā)現(xiàn)噬肺軍團菌基因組編碼的3個蛋白Lpg2830、Lpg2144和Lpg0171分別含有真核細(xì)胞所特有的U-Box(Lpg2830)和F-Box(Lpg2144和Lpg0171)結(jié)構(gòu)域，這兩個結(jié)構(gòu)域均廣泛存在于真核細(xì)胞的泛素系統(tǒng)中，能夠單獨或與其它細(xì)胞成分形成復(fù)合物催化泛

3、素修飾反應(yīng)。在此，通過實驗我們驗證了Lpg2830在體內(nèi)體外均擁有泛素連接酶的活性，可以利用UbcH5進行自泛素化修飾，Lpg2144與Lpg0l7l均能夠形成SCF復(fù)合物，SCF復(fù)合物在真核細(xì)胞中能夠?qū)⒌孜锓核鼗揎棽⒈坏鞍酌阁w識別降解。Lpg2830、Lpg2144與Lpg0171均能夠通過四型分泌系統(tǒng)進入宿主細(xì)胞，它們通過各自C端的不同定位信號定位于特定的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，在Cos7細(xì)胞中Lpg2830與Lpg0171定位于核周內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)