SOX9和VEGF在小兒先天性脊柱側(cè)彎頂椎生長(zhǎng)板軟骨的表達(dá)研究.pdf

1、先天性脊柱側(cè)彎(Congenital scoliosis,CS)是臨床上較常見(jiàn)的一種小兒先天性脊柱畸形,其發(fā)生發(fā)展主要?dú)w因于先天存在的異常脊椎導(dǎo)致脊柱縱向不平衡生長(zhǎng)。在脊柱縱向發(fā)育過(guò)程中脊椎生長(zhǎng)板軟骨是縱向生長(zhǎng)的基礎(chǔ),頂椎作為先天性脊柱側(cè)彎的觸發(fā)點(diǎn),其生長(zhǎng)板軟骨的化骨活性直接關(guān)系到側(cè)彎的發(fā)生發(fā)展情況。以往研究已證實(shí)脊椎生長(zhǎng)板具有類(lèi)似長(zhǎng)骨生長(zhǎng)板的特性,生長(zhǎng)分化受多種細(xì)胞因子的調(diào)控。其中SOX9是一個(gè)與哺乳動(dòng)物的性別決定因子SRY(Y染色體

2、上的性別決定區(qū))具有高度同源性的轉(zhuǎn)錄因子,表達(dá)于除肥大軟骨細(xì)胞外所有分化型軟骨細(xì)胞,并貫穿整個(gè)軟骨形成過(guò)程,被認(rèn)為在軟骨內(nèi)成骨的初始階段發(fā)揮著重要作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是刺激內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和血管再生的一個(gè)重要因素,研究發(fā)現(xiàn)在軟骨內(nèi)化骨過(guò)程中對(duì)于軟骨細(xì)胞死亡,細(xì)胞外基質(zhì)重塑,血管生成和骨骼形成是一種基本的調(diào)節(jié)物質(zhì)。因此通過(guò)對(duì)側(cè)彎頂椎凸凹兩側(cè)生長(zhǎng)板軟骨VEGF和SOX9表達(dá)情況的檢測(cè)可以判斷側(cè)彎兩側(cè)軟骨板成骨能力的差異,推斷小兒先

3、天性脊柱側(cè)彎發(fā)病和進(jìn)展的分子生物學(xué)基礎(chǔ),為進(jìn)一步的分子生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。
　　 目的：
　　 通過(guò)免疫組化和mRNA原位雜交方法判定先天性脊柱側(cè)彎患兒凸凹兩側(cè)生長(zhǎng)板軟骨SOX9和VEGF的表達(dá)部位和情況,了解兩側(cè)生長(zhǎng)板軟骨生物活性的差異,發(fā)現(xiàn)SOX9和VEGF表達(dá)的相關(guān)性,探討影響先天性脊柱側(cè)彎發(fā)病和進(jìn)展的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 取2010年10月～2011年9月我院收住的20例1～5歲先

4、天性脊柱側(cè)凸患者,男8例,女12例,平均年齡3.2(3.2±0.9)歲,術(shù)前均接受詳細(xì)的體格檢查和影像學(xué)檢查(包括X線片,全脊柱螺旋CT+三維重建,MRI)。入院后經(jīng)患者直系親屬的知情同意后,取術(shù)中切除的半椎體凸凹兩側(cè)生長(zhǎng)板軟骨,常規(guī)HE染色并應(yīng)用免疫組化和mRNA原位雜交的方法對(duì)頂椎生長(zhǎng)板的SOX9和VEGF表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),觀察SOX9和VEGF在頂椎生長(zhǎng)板軟骨的表達(dá)位置,以及在頂椎凸凹兩側(cè)生長(zhǎng)板軟骨的表達(dá)情況,同時(shí)對(duì)SOX9、VEGF

5、和VEGFmRNA的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性研究。凸凹兩側(cè)因子表達(dá)結(jié)果采用配對(duì)t檢驗(yàn),p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析,以p＜0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1、凸凹兩側(cè)生長(zhǎng)板的形態(tài)學(xué)觀察,兩側(cè)軟骨板HE染色可見(jiàn)生長(zhǎng)板有類(lèi)似長(zhǎng)骨生長(zhǎng)板的結(jié)構(gòu),大致可以分為靜止層、增殖層和肥大層軟骨區(qū)。凸側(cè)生長(zhǎng)板軟骨的增殖區(qū)和肥大區(qū)厚度更大,細(xì)胞排列也較緊密。
　　 2、SOX9主要表達(dá)于靜止層

6、和增殖層軟骨細(xì)胞,VEGF主要表達(dá)肥大軟骨區(qū),少量表達(dá)于增殖層,但靜止層未見(jiàn)表達(dá)。SOX9在凸側(cè)生長(zhǎng)板軟骨表達(dá)量為154,376±8.055,凹側(cè)為121.413±6.751,VEGF在凸凹兩側(cè)生長(zhǎng)板軟骨的表達(dá)量分別為134.989±9.731,108.498±8.737,VEGFmRNA在凸凹兩側(cè)生長(zhǎng)板的表達(dá)為116.517±7.536和97.077±6.627,分別經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)p均＜0.05,SOX9、VEGF、VEGFmRNA在頂

7、椎凸凹兩側(cè)生長(zhǎng)板軟骨的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.對(duì)脊椎生長(zhǎng)板軟骨SOX9和VEGF的表達(dá)進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析,r=0.650,p＜0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)VEGF的表達(dá)和VEGFmRNA的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析,r=0.343,p＞0.05。無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1、先天性脊柱側(cè)彎患者頂椎生長(zhǎng)板軟骨,大體觀凸側(cè)較凹側(cè)具有較高的生物活性。
　　 2、SOX9、VEGF和VEGFm