PTHrP和Ihh在豬脊柱側(cè)凸模型椎體軟骨終板中的表達及意義.pdf

1、特發(fā)性脊柱側(cè)凸（idiopathic scoliosis,IS）是臨床上比較常見的一種脊柱三維畸形，尤其好發(fā)于兒童及青少年人群，其發(fā)病機制復雜，病因尚未明確。軟骨內(nèi)成骨是軀干骨形成的主要方式，椎體上下端的軟骨終板在脊柱的縱向生長中發(fā)揮關鍵作用，其成骨的活性與側(cè)凸的發(fā)生存在密切關系，受一系列內(nèi)分泌激素及信號系統(tǒng)的精密調(diào)控。近年來研究者們已證實Sox9，F(xiàn)GF，TGF等細胞因子與特發(fā)性脊柱側(cè)凸形成的關系，但 Ihh-PTHrP信號系統(tǒng)對脊柱

2、側(cè)凸發(fā)生發(fā)展的影響卻鮮見報道。Ihh是印度豪豬蛋白的簡稱，屬于 Hedgehog基因家族中的一種亞型，主要在前肥大和肥大軟骨期細胞上表達,在軟骨內(nèi)成骨過程中起至關重要的作用；PTHrP基因定位于人第12條染色體，主要由關節(jié)處的軟內(nèi)細胞分泌，且作用于下層細胞，抑制肥大細胞凋亡和軟骨細胞的進一步分化，是軟骨增殖、分化及生長形成過程中的另一個重要因素。本實驗通過對豬脊柱側(cè)彎模型凹凸側(cè)椎體軟骨終板中 Ihh、PTHrP表達水平的研究，推斷其兩側(cè)

3、軟骨內(nèi)化骨的差異，進一步探索特發(fā)性脊柱側(cè)凸發(fā)生發(fā)展的分子生物學機制。
　　目的:
　　通過免疫組化方法來對 Ihh、PTHrP在豬側(cè)彎模型雙側(cè)椎體軟骨終板中的表達水平及部位進行了解，證實Ihh與PTHrP在軟骨中表達的相關性，探討豬脊柱側(cè)凸模型形成的分子生物學機制，為更深入地研究人特發(fā)性脊柱側(cè)凸的病因?qū)W奠定基礎。
　　方法：
　　取2月齡脊柱側(cè)彎幼豬2只，隨機編為1號、2號，自代償彎椎體凸側(cè)、中央及凹側(cè)分別取下軟

4、骨終板共計48份作為實驗組，分為A（凸側(cè)）、B（中央）、C（凹側(cè)）3組，每組16份；另取2月齡正常幼豬2只，隨機編為3、4號，處死后自T10-L2椎體左右側(cè)分別取下軟骨終板共計32份作為空白對照組，分為D（左側(cè)）、E（右側(cè)）組，每組16份。通過免疫組化方法對5組軟骨終板的Ihh、PTHrP的表達進行檢測，觀察兩種因子在各組中的表達水平及部位，并檢測其在各樣本中的平均光密度值。
　　結(jié)果：
　　1、豬側(cè)彎模型各節(jié)段椎體終板HE

5、染色均存在類似長骨的生長板結(jié)構(gòu)，呈淡藍色，大致可分為儲備區(qū)、增生區(qū)、成熟區(qū)及鈣化區(qū)，實驗組頂椎凹側(cè)生長板較凸側(cè)稍薄，雙側(cè)細胞數(shù)及細胞體積無明顯差異，空白對照組間雙側(cè)未見明顯差異；
　　2、Ihh主要表達于軟骨終板中的增殖軟骨細胞及肥大軟骨細胞胞漿中，PTHrP在軟骨終板中的儲備區(qū)、增殖區(qū)及成熟區(qū)軟骨細胞胞漿中均存在表達，但以增殖區(qū)及成熟區(qū)軟骨細胞中的表達為主；
　　3、Ihh在 A、B、C、D、E五組的表達量分別為0.350

6、4±0.0233，0.2473±0.0286，0.1126±0.0306，0.2189±0.0366，0.2365±0.0226，PTHrP在A、B、C、D、E五組的表達量分別為0.4306±0.0154，0.2376±0.0248，0.1473±0.0229，0.2471±0.0218，0.2685±0.0456；A組與B、C、D、E組比較，p值均<0.01，具有統(tǒng)計學差異；C組與A、B、D、E組進行比較，p值均<0.01，具有統(tǒng)計學

7、差異；B、D、E組進行比較，p值均>0.01，無統(tǒng)計學差異；
　　4、對 Ihh、PTHrP的表達進行簡單相關分析，r值=0.585，p值<0.01，具有統(tǒng)計學意義，存在正相關關系。
　　結(jié)論：
　　1、軟骨終板的成骨活性在實驗組中凸側(cè)明顯高于凹側(cè)，而在空白對照組雙側(cè)則無明顯差異；
　　2、Ihh、PTHrP在實驗組中的表達為A（凸側(cè)）>B（中央）>C（凹側(cè)），這種差異性表達可能與豬脊柱側(cè)凸模型的形成密切相關；<