實驗性單側(cè)前牙反牙合修復(fù)體對大鼠髁突軟骨中Ihh-PTHrP信號軸表達的影響.pdf

1、骨骼的縱向生長依賴于生長板的軟骨內(nèi)成骨過程,此過程中軟骨細胞依次經(jīng)歷增殖、成熟、肥大化及最終凋亡等階段。軟骨內(nèi)成骨受眾多信號通路的共同調(diào)節(jié),以維持生長板的特有結(jié)構(gòu)及細胞動力學(xué)特點。PTHrP主要由關(guān)節(jié)周圍軟骨細胞分泌,具有促進軟骨細胞增殖、抑制其分化及凋亡的功能。Ihh是脊椎動物Hedgehog蛋白家族中的一員,主要由前肥大軟骨細胞分泌。Ihh能夠誘導(dǎo)關(guān)節(jié)周圍軟骨膜中PTHrP生成增加,PTHrP與軟骨細胞表面其受體PTH1R結(jié)合,能夠

2、抑制軟骨細胞向前肥大、肥大軟骨細胞分化,維持其增殖狀態(tài),導(dǎo)致Ihh的表達下降,即形成Ihh與PTHrP之間的負反饋環(huán)調(diào)節(jié)。顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)病是一種常見的口腔疾病,關(guān)節(jié)軟骨漸進性退變及軟骨下骨改建為其典型的病理改變。大量關(guān)于OA病理機制的研究表明,Ihh/PTHrP信號軸異常與該疾病的發(fā)生密切相關(guān)。本研究首次建立單側(cè)前牙反牙合的咬合紊亂大鼠模型,探究顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨在此異常咬合力刺激下的組織學(xué)改變及髁突軟骨中Ihh/PTHrP信號軸的表

3、達變化。
　　研究方法:
　　6周齡雌性SD大鼠60只,體重140-160g,隨機、等量分為對照組和實驗組。實驗組大鼠在麻醉、隔濕的條件下左側(cè)上下前牙分別粘接統(tǒng)一規(guī)格的金屬不良修復(fù)體,造成左側(cè)前牙反牙合的異常咬合接觸。對照大鼠采用同樣的操作,但不粘接不良修復(fù)體,給予同樣的飼養(yǎng)環(huán)境至實驗結(jié)束。分別于實驗開始的2、4及8周末取材,使用蘇木素-伊紅染色探究大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨的組織形態(tài)學(xué)變化,通過免疫組織化學(xué)染色、Realtim

4、e-PCR檢測髁突軟骨中PTHrP、PTH1R、Ihh及Ptch等的蛋白或mRNA水平表達。
　　結(jié)果:
　　1.HE染色結(jié)果:對照組髁突軟骨表面光滑而連續(xù),細胞排列有序,由表及里依次為纖維層、增殖層、肥大層和鈣化軟骨層。實驗2周組的軟骨退變多表現(xiàn)為局部的細胞排列紊亂;4周組可見小面積的無細胞區(qū)形成;8周組出現(xiàn)明顯骨關(guān)節(jié)病樣變,典型改變?yōu)?均質(zhì)嗜酸性染色區(qū)形成、核固縮、纖維降解、細胞增殖成簇及軟骨陷窩空虛。實驗2周組軟骨細胞

5、數(shù)目較對照組明顯增加(P<0.01),4、8周組軟骨細胞數(shù)目顯著減少(P<0.01、P<0.01)。
　　2.免疫組化結(jié)果:PTHrP陽性細胞主要分布于髁突軟骨肥大淺層,實驗8周組陽性細胞率顯著增加(P<0.01);PTH1R陽性細胞主要位于髁突軟骨肥大淺層,實驗8周組陽性細胞顯著減少(P<0.01);Ptch主要在髁突軟骨肥大層表達,實驗8周組陽性細胞顯著增加(P<0.01)。
　　3.Real-timePCR結(jié)果:與對照

6、8周相比,實驗組8周組髁突軟骨中的PTHrP和IhhmRNA水平顯著升高(P<0.01、P<0.01),PTH1R和PtchmRNA表達較明顯降低(P<0.01、P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.大鼠左側(cè)上、下前牙粘接統(tǒng)一規(guī)格金屬不良修復(fù)體,造成左側(cè)前牙反牙合的異常咬合,可導(dǎo)致TMJ髁突軟骨出現(xiàn)骨關(guān)節(jié)病樣病理性改建。
　　2.咬合紊亂可致PTHrP、Ihh及Ptch表達升高,但PTH1R的表達水平未見升高,可能是實