5-羥色胺在大鼠海馬CA1、CA2和CA3的表達(dá).pdf

1、目的：大鼠海馬屬于腦的邊緣系統(tǒng)，包括CA1、CA2和CA3。在結(jié)構(gòu)上無明顯分界標(biāo)志，功能上可視為一個整體。5-羥色胺(5-HT)，一種在中樞神經(jīng)系統(tǒng)廣泛分布的神經(jīng)遞質(zhì)，主要參與情感、睡眠、疼痛、學(xué)習(xí)記憶等復(fù)雜生理功能的調(diào)節(jié)。為了解5-羥色胺在海馬中的分布特點，本實驗采用5-HT特異性抗體的方法，利用免疫組織化學(xué)技術(shù)，觀察海馬CA1、CA2和CA3中三個區(qū)域5-HT神經(jīng)元及神經(jīng)纖維終末的表達(dá)，為進(jìn)一步研究5-HT在海馬學(xué)習(xí)、記憶的作用機(jī)制

2、，提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。
　　 方法：1、實驗動物和主要試劑：成年雄性SD大鼠8只（由大連醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供）、山羊超敏二步法免疫組化檢測試劑、濃縮型DAB（購自北京中杉金橋）。2、灌注固定：把大鼠經(jīng)10％水合氯醛進(jìn)行腹腔麻醉。仰臥固定，用剪刀打開胸腔，將穿刺針經(jīng)左心室插入升主動脈，剪開右心耳，先用150ml生理鹽水快速沖洗后，給予4%多聚甲醛磷酸緩沖液300ml灌注，持續(xù)灌注4小時后斷頭開顱取腦，放入相同固定液中4℃過夜。在振

3、動切片機(jī)連續(xù)冠狀切片，片厚30um，選取具有海馬的切片，置入0.01mol/L的PBS（PH值7.4）溶液中備用。3、免疫組織化學(xué)法：采用二步法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。4、統(tǒng)計學(xué)分析：在正置熒光顯微鏡圖像分析儀觀察拍攝，核團(tuán)定位參照George Raxinos，CharlesWatsonbian編著的The Rat Brain in stereotaxic coordinates（大鼠腦立體定位圖譜，第三版）。在低倍鏡下觀察海馬和5-HT

4、陽性神經(jīng)元在海馬中CA1、CA2和CA3區(qū)的表達(dá)。在高倍鏡下觀察5-HT陽性神經(jīng)纖維終末。所得數(shù)據(jù)采用SPSS16.5軟件分析。
　　 結(jié)果：在低倍光鏡下觀察：1、大鼠海馬內(nèi)5-HT免疫反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色(圖1a)，可見大量的5-HT能陽性神經(jīng)元和樹突。陽性產(chǎn)物位于胞漿中，細(xì)胞核透明，未見明顯染色(圖2a，3a，4a)2、免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物在海馬錐體層細(xì)胞中分布最多，密集呈帶。3、在20×10倍光鏡下計數(shù)，CA2區(qū)免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元

5、數(shù)最多，其次是CA1區(qū)，CA3區(qū)最少。4、CA3的細(xì)胞比其它區(qū)域略小，染色比CA1區(qū)弱。在高倍鏡下：1、在海馬CA1、CA2和CA3中呈陽性反應(yīng)的神經(jīng)元胞體為圓形或卵圓形。2、海馬內(nèi)可見免疫反應(yīng)陽性、呈串珠狀的5-HT能神經(jīng)纖維終末(圖2b，3b，4b)。免疫反應(yīng)對照切片為陰性(4×10)，未見CA1、CA2和CA3區(qū)有5-HT免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元及神經(jīng)纖維終末表達(dá)。統(tǒng)計學(xué)結(jié)果：CA1、CA2和CA3區(qū)陽性神經(jīng)元平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差分別是5.6