IgA腎病Balb-c小鼠模型的建立.pdf

1、目的：
　　IgA腎病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜、臨床表現(xiàn)多樣、病理表現(xiàn)獨(dú)特，易發(fā)展為終末期腎病。當(dāng)前，國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者都在進(jìn)行其發(fā)病機(jī)理及臨床治療方案的探索。本研究旨在通過(guò)現(xiàn)代生物工程技術(shù)構(gòu)建重組蛋白，并以此蛋白作為抗原物質(zhì)，通過(guò)主動(dòng)免疫的方式來(lái)構(gòu)建 IgA腎病 Balb/c小鼠動(dòng)物模型，為疾病的發(fā)生、發(fā)展和臨床治療的進(jìn)一步研究提供基礎(chǔ)的病理生理資料。
　　方法：
　?。?）先使用化學(xué)合成的方法獲得編碼耐甲氧西林金黃色葡萄球菌細(xì)胞膜

2、20肽的基因（SA0587-GFP融合蛋白基因序列），然后利用基因工程技術(shù)將該基因?qū)氪竽c埃希菌中，構(gòu)建可表達(dá)目的蛋白的原核質(zhì)粒，通過(guò)細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖獲取融合蛋白SA0587，純化后分裝凍存?zhèn)溆谩?br>　　（2）將Balb/c小鼠分為4組，每組6只。實(shí)驗(yàn)組包括用SA0587-GFP皮下注射組和SA0587-GFP尾靜脈注射組，對(duì)照組包括綠色熒光蛋白（GFP）皮下注射組和綠色熒光蛋白（GFP）尾靜脈注射組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察小鼠存活和生長(zhǎng)情況

3、，從第八周開(kāi)始，每隔一周收集一次小鼠的尿液，檢測(cè)小鼠其尿蛋白含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取小鼠腎臟制作病理切片，HE染色觀察小鼠腎臟病理改變，使用熒光共聚焦顯微鏡觀察腎臟免疫復(fù)合物的沉積情況，以判斷造模成效。
　　結(jié)果：
　?。?）大腸埃希菌體內(nèi)的原核重組質(zhì)粒成功表達(dá)融合蛋白。（2）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果中SA0587皮下注射組和SA0587尾靜脈注射組小鼠尿液中蛋白含量高于對(duì)照組；腎臟病理結(jié)果顯示出炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、組織水腫、蛋白管型和IgA沉積等